Atriplex Canescens є новим господарем для Cistanche Deserticola

Контакт: emily.li@wecistanche.com

Фанмін Ван та ін

Анотація

Cistanche deserticolaісторично використовувався в традиційній китайській медицині для доповнення функції нирок (ян), покращення крові та есенції та зволоження кишечника для проходження стільця. Його хазяїн, Haloxylon ammodendron, є важливою рослиною-піонером, яка використовується для захисту від вітру та закріплення піщаних дюн, які є стратегіями, що використовуються для контролю опустелювання. Довгий час вважалося, що C. deserticola може паразитувати лише на H. ammodendron. У цьому дослідженні було проведено морфологічну ідентифікацію, ідентифікацію штрих-кодування генів та експерименти з інокуляцією, і ми зрештою виявили, що C. deserticola також може паразитувати на Atriplex canescens. A. canescens є видом Chenopodiaceae із широким діапазоном адаптивності. Порівняно з H. ammodendron, він має більшу біомасу та ширший діапазон екологічної адаптованості, що робить його більш придатним для промислового виробництва C. deserticola. Крім того, ми також виявили, що концентрація активних компонентів була вищою у C. deserticola, що паразитувала на A. canescens, ніж у тих, що паразитували на H. ammodendron; це відкриття також свідчить про те, що застосування C. deserticola у більших масштабах вимагає подальших досліджень.

Ключові слова:Cistanche deserticola, Паразитизм, ідентифікація на основі штрих-коду ДНК, традиційна китайська медицина, цистанхе сальса

Натисніть тут, щоб дізнатися більше про цистанче

1. Введення

Застосування цистанхе в традиційній китайській медицині було вперше записано в трав'яному Писанні Шеннонг через його вплив натонуванняниркаян, підвищеннявсутністьзкров, ізволоженнявкишечникдля полегшення проходження стільця. Він також був зафіксований у працях стародавньої фітотерапії як "пустеляженьшень'. Сухі м’ясисті стебла та лускоподібне листя Cistanche deserticola YC Ma та Cistanche tubulosa (Schenk) Wight були першим з’єднанням, описаним у 2005 році в Китайській фармакопеї. Цистанче в основному вирощують у Сіньцзяні, Внутрішній Монголії та Ганьсу в Китаї, а в усьому світі він зустрічається в напівпосушливих і посушливих районах на всьому європейському Піренейському півострові, у Північній Африці, Аравії, Ірані, Афганістані, Пакистані, Північній Індії, Монголії тощо. ал. [1]. Він стійкий до суворих умов навколишнього середовища, таких як надзвичайно посушливий клімат, різкі перепади температур і виснажені ґрунти [2]. Згідно з таксономічним індексом вищих рослин Китаю, у Китаї існує шість видів цистанх. Проте подальше дослідження підтвердило існування лише чотирьох видів і одного варіанту Cistanche, а саме C. deserticola YC Ma, C. tubulosa (Schenk) R. Wight, C. salsa (CA Mey.) G. Beck, C. sinensis G. Beck і C. salsa var. albiflflora П. Ф. Ту та ін., [3].

C. deserticola вважається єдиним традиційним джерелом Cistanche і має довгу історію використання в медицині, починаючи з часів династії Східна Хань (25 р. н. е. – 220 р. н. е.) [4]. У Compendium of Materia Medica (написаний Лі Шіжень, династія Мін), було задокументовано, що він плавно тонізує ян (на відміну від інших трав, які мають більш сильну дію). Сучасними фітохімічними методами з C. deserticola було виділено низку ефективних хімічних компонентів, включаючи фенілетаноїдні глікозиди, іридоїди, лігнани, альдити, олігосахариди, полісахариди та алкалоїди [5]. Фармакологічні дослідження показали, що основним діючим компонентом є фенетилглікозид, про що повідомлялосяпокращитистатевийфункція, докладати зусильнейропротекторнийефекти, покращитинавчанняіпам'ять, ізахиститивпечінка. Він також має терапевтичний ефект проти деменції,хвороба Альцгеймеразахворювання, хвороба Паркінсона захворювання, втома, іпухлиниразом з експонатамианти-запальнийіімуномодулюючийвластивості [6, 7].

C. deserticola є облігатною рослиною-паразитом, яка живе виключно на коренях Haloxylon ammodendron [8]. Дослідження показало, що C. deserticola навіть не знайдено в Haloxylon persicum [9]. В останні роки все більша увага приділяється C. deserticola, оскільки вона не тільки є джерелом лікарських компонентів, але й робить значний внесок у боротьбу з опустелюванням [10]. H. ammodendron є єдиним господарем, який використовувався в дослідженнях за участю C. deserticola. У квітні 2017 року Ван Шуай, співробітник Фонду громадського добробуту Чжецзян Кухен, інокулював насіння C. deserticola на Atriplex canescens у пустельному ботанічному саду Мінкінь, провінція Ганьсу, і було виявлено, що C. deserticola цвіте в травні 2018 року і продовжує цвісти. цвісти до травня 2019 року. Однак насіння було придбано на ринку, і сумнівно, чи це справді насіння C. deserticola. Крім того, це явище порушує традиційні знання та потребує подальшого вивчення

A. canescens — це багаторічний чагарник С4, що походить із пустель Південно-Західної Америки і швидко адаптується до умов засолення, важких металів, посухи та високих температур [11]. Оскільки він дуже смачний і багатий поживними речовинами, його використовують як корм для більшості худоби та великих тварин [12]. Крім того, він особливо корисний для боротьби з ерозією та рекультивації маргінальних земель завдяки своїй чудовій адаптивності та розгалуженій кореневій системі. Вперше він був завезений до Китаю зі Сполучених Штатів Америки в 1989 році та широко використовувався для збереження ґрунту та води, закріплення піску та відновлення засолених земель [13]. Хоча дослідження, яке повідомляє про ріст C. deserticola на A. canescens, скасовує виняткове паразитарне розуміння C. deserticola, це може виявитися революційним відкриттям, оскільки A. canescens більше підходить для росту C. deserticola, оскільки він має більшу біомасу та ширший діапазон екологічної адаптивності порівняно з H. ammodendron.

Щоб переконатися в точності випадкового відкриття, було проведено експерименти з ідентифікації рослин та штучного інокуляції. Традиційна ідентифікація рослин включає органолептичну оцінку (таку як дотик, нюх, зір і смак), аналіз морфологічних характеристик (таких як мікроскопічні та макроскопічні) та хімічний профіль (такий як високоефективна рідинна хроматографія, тонкошарова хроматографія та газова хроматографія). хроматографія) [14]. Відносно просто виключити C. tubulosa та C. Sinensis через різницю в розмірі, кольорі та розташуванні судинних пучків у стеблі. Справжнім завданням є відрізнити C. deserticola від C. salsa. За даними Флори Китаю, довжина приквітка C. salsa становить близько 1/3 віночка, тоді як у C. deserticola вона така ж. Зріз м’ясистих стебел схожий між C. deserticola та C. salsa і складається з епідермісу, кори, судинних пучків і серцевини. Основна відмінність полягає в оболонці судинного пучка, оскільки вона хвостата для C. deserticola та трикутна або напівкругла для C. salsa.

В останні роки технологія штрихового кодування ДНК часто використовується для ідентифікації видів. Це процес, у якому використовується коротка послідовність ДНК зі стандартного геному, яка, як правило, зберігається і не піддається впливу зовнішніх факторів, таких як вік і тип рослинної тканини. Популярними послідовностями-кандидатами для штрих-кодів ДНК рослин є rbcL, matK, psbA-trnH, ITS та ITS2 [15]. Кілька досліджень показали, що ITS/ITS2 є найефективнішим інструментом ідентифікації рослин. Було також запропоновано, щоб область ITS2 була включена в основні штрих-коди через її вищу дискримінаційну здатність, ніж у пластидних штрих-кодів. Було визнано, що ITS2 можна використовувати як новий універсальний штрих-код для ідентифікації широкого спектру таксонів рослин [16, 17, 18, 19, 20, 21]. Хоча багато досліджень намагалися визначити універсальний штрих-код рослини, жоден із доступних локусів не працює для всіх видів, тому для розрізнення видів рослин необхідний багатолокусний метод [22, 23, 24, 25, 26, 27, 28] . У цьому дослідженні ITS2, rbcL, psbA-trnL використовувалися як штрих-коди.

Окрім методів морфологічної та молекулярної ідентифікації, прямі докази надходять з експериментів з інокуляції. Необхідно провести експерименти з інокуляції, щоб продемонструвати, що C. deserticola може паразитувати на A. canescens. Крім ідентифікації, основним фактором стає контроль якості. Необхідні подальші дослідження, щоб з’ясувати різницю між якістю C. deserticola, що паразитує на корені H. ammodendron, і того, що паразитує на A. canescens.

2. Матеріали та методи

2.1. Рослинна сировина

Цистанхея росте на м’яких піщаних ґрунтах з помірним засоленням, зазвичай паразитуючи на бічних коренях хазяїна глибиною 30–100 см. Клімат у відповідній зоні вирощування посушливий, з меншою кількістю дощів, з великим випаровуванням, тривалим сонячним часом і великою різницею температур між денною та нічною. Місцями збору цих зразків є повіт Мінцінь і місто Байїн. Вони географічно близькі та мають помірно-континентальний посушливий клімат із середньорічною кількістю опадів 113,2 мм і середньою річною відносною вологістю 44 відсотки. Конкретна та детальна інформація про збір зразків наведена в таблиці 1. Усі зразки були заморожені та збережені при -20 C у Державній ключовій лабораторії природних і біоміметичних препаратів, Пекін, Китай.

2.2. Фарбування тканин і спостереження

Свіжі зразки були отримані та збережені в розчині, що складається з 70 відсотків етанолу, крижаної оцтової кислоти та формальдегіду у співвідношенні 90:5:5, і були зневоднені за допомогою градієнта етанолу (75 відсотків, 95 відсотків, 100 відсотків, 100 відсотків) протягом 1 год. Зневоднені зрізи піддавали градієнту ксилолу (25 відсотків, 50 відсотків, 75 відсотків, 100 відсотків, 100 відсотків) протягом 1 години, щоб отримати прозорі зрізи. Прозорі зрізи піддавали інфільтрації парафіном, при цьому об’єм парафіну, рівний об’єму ксилолу, додавали до ксилолу, що містить зразок, потім половину отриманого розчину відсмоктували і знову додавали рівний об’єм парафіну. Цей процес повторювали 10 разів і, нарешті, всі розчини відсмоктували та замінювали рівним об’ємом парафіну; цю останню стадію повторювали двічі, і отриманий розчин після кожної стадії інкубували протягом 1 години при 75°C. Після інфільтрації парафіном зрізи піддавали заливанню, при цьому зразки поміщали в залізний резервуар, що містить рідкий парафін, і додаткову кількість рідкого парафіну швидко додають, щоб заповнити весь резервуар, і залишають для застигання. Отриманий восковий блок був обрізаний і розрізаний. Вбудовані зрізи поміщали в теплу воду, закінчували, поміщали на предметне скло та інкубували при 45 °C протягом 30 хв. Зрізи на предметному склі депарафінізували шляхом послідовного замочування в 100% ксилолу, 100% ксилолу, 50% ксилолу, 50% ксилолу, 100% етанолу, 100% етанолу, 95% етанолу та 75% етанолу, а потім замочували в сафраніні O протягом 40 хв. За цим слідував ще один серійний раунд швидкого замочування в 75-відсотковому та 95-відсотковому етанолі, а потім предметні скла занурювали у швидкий зелений розчин на 1 хвилину. Нарешті, зрізи піддавали останньому серійному замоченню в 95-відсотковому етанолі, 95-відсотковому етанолі, 100-відсотковому етанолі, 100-відсотковому етанолі, 50-відсотковому ксилолі, 50-відсотковому ксилолі та 100-відсотковому ксилолі. Після фарбування зрізів на предметне скло помістили краплю смоляного клею, а поверх нього помістили покривне скло. Предметні скла залишали без турботи протягом тижня, а зрізи тканин спостерігали за допомогою оптичного мікроскопа Olympus і знімали зображення.

2.3. Екстракція ДНК та ПЛР-ампліфікація

Загальну геномну ДНК екстрагували зі зразків квітів за допомогою набору для екстракції геномної ДНК рослин (Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Пекін, Китай) згідно з протоколами виробника. Праймери для ампліфікації генів і секвенування, а також умови реакції наведені в таблиці 2. Кожну ампліфікацію гена повторювали тричі для кожного зразка.

2.4. Аналіз секвенування

Щоб отримати точні послідовності, кінцеві продукти ПЛР після очищення за допомогою наборів для швидкої екстракції трансгенів клонували окремо в pEASY®-Blunt Cloning Vectors відповідно до інструкцій виробника. Після клонування їх трансформували в хімічно компетентні клітини Trans5ɑ. Три колонії кожного зразка були випадковим чином відібрані та секвеновані з використанням праймерів M13. Ці колонії секвенували двонаправлено за допомогою секвенування Сенгера з використанням наборів циклічного секвенування BigDye Terminator V3.1 на аналізаторах ДНК ABI Prism 3700. Отримані послідовності були вирівняні за допомогою Clustal X (v1.8.7) [29] і синхронізовані вручну в BioEdit (v7.1.3.0) [30]. Використовуючи дані про вирівняні послідовності, ми реконструювали філогенію за допомогою програмного забезпечення MEGA 7, використовуючи метод приєднання сусідів (NJ), використовувалась модель 2-параметра Кімури (K2P), а завантажувальна система становила 1000 повторень [31].

2.5. Інокуляція C. deserticola

Три грами насіння C. deserticola додавали в горщики (діаметр, висота, діаметр дна ¼ 20 см- 20 см-12 см), що містили піщаний ґрунт, і перемішували, щоб забезпечити рівномірне розподілення. Контрольна група складалася з 3 г насіння C. salsa, доданих у подібні горщики з піщаним ґрунтом. Нарешті, A. canescens було висаджено в кожен горщик, і горщики були розміщені на відкритому повітрі. Коли вологість ґрунту становить менше 13 відсотків (г/г), горщики поливають. Експеримент проводився в Науковому парку Чжунгуаньцунь, Пекін, Китай (широта 39-560 N, довгота 116 200 E; 20 м над рівнем моря) з травня по липень. Температура повітря вдень коливалася від 16 до 35 градусів тепла, вночі від 12 до 16 - тепла. Відносна вологість повітря більше 50 відсотків. Сонячного світла багато. Приблизно через 80 днів ґрунт видаляли з горщиків і визначали швидкість інокуляції.

2.6. Визначення концентрації лікарських компонентів

Визначення концентрації лікарських компонентів включає дві частини, одна - це процедура рідинної хроматографії, а інша - приготування еталонної речовини та досліджуваної речовини, більш детально:

i). Визначення ехінакозиду та вербаскозиду. Ехінакозид і вербаскозид зважували та додавали в 50% метанолу, щоб отримати 0.2 мг/мл розчину, який використовували як розчин порівняння. Перший полягає в тому, щоб подрібнити сухий C. deserticola в порошок, порошок змішали з 50 мл 50% метанолу в коричневій мірній колбі на 100 мл, і досліджувану рідину одержали після струшування суміші, замочування , ультразвукова обробка, стояння та фільтрація. Хроматографічною колонкою була колонка Agilent ZORBAX SB-C18 (4,6 мм 150 мм, 5 мкм), з метанолом (A) - 0.1% розчином мурашиної кислоти (B) як рухомою фазою, градієнтне елюювання (0–17 хв, 26,5 % A; 17–20 хв, 26,5 % → 29,5 % A; 20–27 хв, 29,5 % A), швидкість потоку становила 1,0 мл/хв, температура колонки становила 35 C, довжина хвилі детектування становила 330 нм, об’єм ін’єкції був 10ул.

ii). Визначення бетаїну, маніту, фруктози, глюкози та сахарози. Бетаїн, маніт, фруктозу, глюкозу та сахарозу точно зважили та додали у воду, щоб отримати розчин {{0}}.25 мг/мл, який був використовується як еталонний розчин. П’ять мілілітрів вищезгаданого тестового розчину Cistanche змішували з 50% метанолу в мірній колбі об’ємом 25 мл, добре струшували та фільтрували через мікропористу мембрану 0,2 мкм. Хроматографічною колонкою була колонка з полімеризованим гелем SHODEXASHAIPAK NH2P-50 4E (250 мм 4,6 мм, 5 мкм), рухома фаза – ацетонітрил-вода (77:23), швидкість потоку – 0,7 мл/хв, температура колонки – 25 C. Використовуючи детектор світлорозсіювання випаровування (ELSD), температура дрейфової трубки становила 100 C, швидкість потоку газу-носія становила 3 ​​л/хв, об’єм ін’єкційної речовини порівняння та зразка становив 5 мкл.

3. Результати

3.1. Морфологічна ідентифікація квітів

Щоб підтвердити вид Cistanche, який паразитує на A. canescens, було проведено морфологічний аналіз зразків квіток (рис. 1 і рис. S1). Загальна морфологія квіток рослини-паразита була подібна до морфології C. deserticola. Крім того, віночок був товщі, ніж у C. salsa на різних хостах. Згідно Флори Китаю, C. deserticola і C. salsa мають очевидні відмінності в приквітках квіток. У C. deserticola приквітки приблизно дорівнюють віночку, тоді як приквіток C. salsa становить 1/3 довжини віночка. Згідно з нашим статистичним аналізом, приквітки Cistanche паразитували на A. canescens, а приквітки C. deserticola були меншими за віночок (рис. S2). Cistanche на A. canescens демонструє морфологічні ознаки C. deserticola, що свідчить про те, що C. deserticola може бути паразитом на A. canescens.

Малюнок 1. Морфологічні особливості квіток цистанхи. (A) Cistanche deserticola (хазяїн: Haloxylon ammodendron); (B) Cistanche (хазяїн: Atriplex canescens); (C) Cistanche salsa (хазяїн: Sympegma regelii); (D) Cistanche salsa (господар: Salsola passerina).

3.2. Мікроскопічна ідентифікація пофарбованих зразків тканин

Зріз м’ясистого стебла C. deserticola дуже схожий на зріз C. salsa, і обидва вони складаються з епідермісу, кори, судинного пучка та серцевини. Судинні пучки обох рослин розташовані хвилястими або глибокими хвилястими кільцями, добре видно серцевини. Основна відмінність полягає в латеральній формі оболонки судинного пучка; він хвостатий у C. deserticola і трикутний або напівкруглий у C. salsa. Виконавши аналіз мікроструктури Cistanche, що паразитує на A. canescens, ми виявили, що він має оболонку судинного пучка у формі хвостатої кістки, схожу на оболонку C. deserticola (рис. 2).

Малюнок 2. Мікроскопічні характеристики м’ясистого стебла в різних видів Cistanche. (A) Мікроскопічні характеристики м’ясистого стебла Cistanche deserticola: 1. епідерміс, 2. кортекс, 3. пучок листя, 4. судинний пучок, 5. медулярний промінь, 6. оболонка судинного пучка, 7. флоема, 8. ксилема , 9. серцевина. (B) Збільшений вигляд судинного пучка Cistanche deserticola: 1. оболонка судинного пучка, 2. волокно, 3. пролінові клітини, 4. луб’яне волокно, 5. флоема, 6. ксилема, 7. судина, 8. нейлон. (C) Мікроскопічні характеристики м’ясистого стебла Cistanche salsa: 1. епідерміс, 2. пучок листя, 3. кора, 4. судинний пучок, 5. медулярний промінь, 6. серцевина. (D) Збільшений вигляд судинного пучка Cistanche salsa: 1. оболонка судинного пучка, 2. пролінові клітини, 3. волокно, 4. флоема, 5. судина, 6. ксилема. (E) Мікроскопічні характеристики м’ясистого стебла Cistanche, що паразитує на Atriplex canescens 1. епідерміс, 2. кора, 3. судинний пучок, 4. медулярний промінь, 5. серцевина. (F) Збільшене зображення судинного пучка Cistanche, що паразитує на Atriplex canescens 1. судина, 2. ксилема, 3. камбій, 4. флоема, 5. оболонка судинного пучка.

3.3. Молекулярна ідентифікація

Окрім морфологічної ідентифікації, ми також провели молекулярну ідентифікацію та відібрали три фрагменти генів, а саме ITS2, rbcL та psbA-trnL. Еволюційне дерево було побудовано з використанням інформації про послідовність кожного фрагмента (рис. 3), і всі три філогенетичні дерева показали, що Cistanche, паразитований на A. canescens, мав тісний філогенетичний зв’язок із C. deserticola. Ці результати показують, що C. deserticola може бути паразитом на A. canescens. Детальні розбіжності генів між різними видами Cistanche спостерігалися після множинного вирівнювання послідовностей (рис. 4). Ми знайшли три одиночних нуклеотидних поліморфізму (SNP) у тілі гена ITS2 між C. deserticola та C. salsa, за основами 139, 295 та 472. У тілі гена rbcL було чотири генні розбіжності між C. deserticola та C. salsa, що містить два SNP і дві мутації інсерції та делеції (indel). Порівняно з ITS2 і rbcL, відмінності в тілі гена psbA-trnL між C. deserticola і C. salsa були більш очевидними, із сімома розбіжностями послідовності, з яких чотири були SNP і три були мутаціями InDel. Зокрема, серія повторів тиміну, починаючи з основи 414 вирівняної послідовності, може бути використана для розробки маркерів простого повторення послідовності (SSR) для розрізнення C. deserticola та C. salsa.

3.4. Інокуляція C. deserticola

Щоб перевірити, чи можуть C. deserticola або C. salsa паразитувати на A. canescens, було проведено експеримент з інокуляції, і ми знайшли докази паразитування в усіх горщиках, інокульованих C. deserticola, із рівнем інокуляції майже 100 відсотків (рис. 5). У контрольних групах паразитування не спостерігалося. Цей результат прямо доводить, що C. deserticola легко паразитував на A. canescens, тоді як C. salsa не міг.

3.5. Визначення концентрації значущих лікарських компонентів

Ми оцінили концентрацію важливих лікарських компонентів у C. deserticola, що паразитує на A. canescens. Конкретна хроматограма показана в додатковому матеріалі. Для отримання точних результатів було поставлено чотири незалежні експерименти. На основі наших вимірювань (таблиця 3) ми виявили, що концентрація вербаскозиду та ехінакозиду в 20 рази вища, ніж зазначено в Китайській фармакопеї (відповідно до Китайської фармакопеї, відсоток від суми концентрацій ехінакозиду і вербаскозид у C. deserticola має бути менше 0.30 відсотків). Концентрації також були значно вищими, ніж у C. deserticola, що паразитує на H. ammodendron (загалом 0,2–1,5 відсотка) [32]. Концентрація маніту, бетаїну, фруктози та інших вуглеводних компонентів також була дуже високою, а загальна якість була кращою, ніж у C. deserticola, що паразитувала на H. ammodendron. Таким чином, ці результати вказують на те, що A. canescens можна використовувати для вирощування C. deserticola на промисловому рівні та захисту диких ресурсів, що знаходяться під загрозою зникнення.

4. Обговорення

Раніше вважалося, що C. deserticola паразитує виключно на H. ammodendron. Однак у цьому дослідженні, використовуючи методи морфологічної та молекулярної ідентифікації, ми продемонстрували, що C. deserticola також може паразитувати на A. canescens. Хоча всі H. ammodendron, A. canescens і H. persicum належать до сімейства Chenopodiaceae, цікавим і незвичайним є те, що C. deserticola має видову селективність, яка, можливо, регулюється сигнальними молекулами, що виділяються господарем. A. canescens, що походить із Сполучених Штатів Америки, виявляє сильну стійкість до впливів навколишнього середовища та має відносно велику біомасу. A. canescens є життєздатним господарем для C. deserticola з різних причин. По-перше, він може виживати в широкому діапазоні умов навколишнього середовища. По-друге, біомаса та швидкість росту C. deserticola можуть бути більшими та швидшими відповідно на A. canescens, ніж на H. ammodendron. По-третє, завдяки широкому діапазону пристосованості A. canescens площа посадки може бути додатково розширена. Таким чином, A. canescens має відмінні переваги перед H. ammodendron як господаря і сприятиме промисловому виробництву C. deserticola.

C. deserticola та C. salsa важко відрізнити, і морфологічна ідентифікація в минулому дала незрозумілі результати. Завдяки прогресу в галузі молекулярної біології методи ідентифікації на основі молекул широко використовуються в китайській фітотерапії. Оскільки більшість китайських фітопрепаратів містять мало геномної інформації, технологія штрихового кодування ДНК стала проривною технікою ідентифікації. У цьому дослідженні морфологічна технологія та технологія штрих-кодування ДНК були комплексно застосовані для ідентифікації невідомих видів Cistanche; цього раніше не робили, і наші результати демонструють, що цей підхід здійсненний.

Оскільки C. deserticola паразитує на A. canescens, важливо визначити відмінності в якості C. deserticola на коренях A. canescent і на коренях H. ammodendron. За нашими результатами концентрація активних компонентів була вищою у C. deserticola, що паразитувала на A. canescens, ніж у H. ammodendron. Таким чином, наші результати закладають міцну теоретичну основу для великомасштабного виробництва C. deserticola, що паразитує на A. canescens.

5. Висновки

Довгий час вважалося, що C. deserticola паразитує виключно на H. ammodendron. Раніше було встановлено, що придбане на ринку насіння C. deserticola може паразитувати на A. canescens, ін.

Рослина Chenopodiaceae. Використовуючи морфологічні та молекулярні методи ідентифікації, ми підтвердили, що вид Cistanche, який паразитує на A. canescens, був C. deserticola. Цей результат був додатково підтверджений експериментом з інокуляції. Ми визначили концентрацію значущих лікарських компонентів, і наші результати свідчать про те, що концентрація та якість компонентів були вищими в C. deserticola, що паразитує на A. canescens, ніж у того, що паразитує на H. ammodendron. Відкриття нових господарів може сприяти промисловому виробництву C. deserticola, а також може ефективно захистити дикі ресурси та екологічне середовище.

Список літератури
[1] DY Tan, QS Guo, CL Wang, Дослідження статус-кво Cistanche deserticola та його експлуатації та використання в Китаї, For. ресурс. кер. 33 (2004) 29–32.
[2] XY Qiao, HL Wang, YH Guo, Дослідження умов проростання насіння Cistanche, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 32 (2007) 1848–1850.
[3] PF Tu, YP He, ZC Lou, Огляд походження та захисту ресурсів Cistanche, Chin. Традиція. трава Наркотики 25 (1994) 205–208.
[4] LD Karalliedde, CT Kappagoda, Проблема традиційної китайської медицини для алопатичних практиків, Am. J. Physiol. серцеве коло. фізіол. 297 (2009) 1967–1969.
[5] Y. Jiang, PF Tu, Аналіз хімічних складових у видах Cistanche, J. Chromatogr. А 1216 (2009) 1970–1979.
[6] T. Wang, XY Zhang, WY Xie, Cistanche deserticola YC Ma, «пустельний женьшень»: огляд, Am. Дж. Чін. Мед. 40 (2012) 1123–1141.
[7] Фармакопея NCOC, Фармакопея Китайської Народної Республіки, The Chemical Industry Press, Пекін, 2020 р.
[8] GX Meng, XS Cui, Y. Wu, YH Guo, Вплив Leveillula saxaouli на ріст, хлорофіл і вуглеводи Haloxylon ammodendron, North. Hortic. 14 (2012) 141–143.
[9] YC Chen, M. Li, MZ Wu, YX Song, Структура та склад коренів у двох видів Haloxylon Bunge, Plant Physiol. J. 49 (2013) 1273–1276.
[10] PF Tu, Y. Jiang, YH Guo, YZ Tian та ін., Розвиток екологічної промисловості Cistanches herba для сприяння екологічній цивілізації західного пустельного регіону, Mod. Підборіддя. Мед. 4 (2015) 297–301.
[11] SC Sanderson, HC Stutz, High chromosome numbers in Mojavean and Sonoran desert Atriplex canescens (Chenopodiaceae), Am. Дж. Бот. 81 (1994) 1045–1053.
[12] JL Peterson, DN Ueckert, RL Potter, JE Huston, Ecotypic variation in selected fourwing salt bush in western Texas, J. Range Manag. 40 (1987) 361–366.
[13] DS Kong, Морфологічні характеристики та екофізіологічна адаптованість Atriplex canescens: огляд, Chin. J. Ecol. 32 (2013) 210–216.
[14] MA Bashir, MS Faezah, SSO Mohd, W. Alina, Огляд: Штрих-кодування ДНК і хроматографічні відбитки пальців для перевірки автентичності рослинних рослинних лікарських засобів. Evid. На основі доповнення, альтернативи. Мед. 2017 (2017) 1–28.
[15] XW Li, Y. Yang та ін., Штрихове кодування ДНК рослин: від гена до генома, Biol. 90 (2015) 157–166.
[16] С. Л. Чен, Х. Яо, Дж. П. Хан та ін. Перевірка області ITS2 як нового штрих-коду ДНК для ідентифікації видів лікарських рослин, PloS One 5 (2010), e8613.
[17] К. Луо, С. Л. Чен, К. Л. Чен та ін. Оцінка кандидатів на штрих-код ДНК рослин із використанням родини Rutaceae, Sci. China Life Sci. 53 (2010) 701–708.
[18] T. Gao, H. Yao, JY Song та ін., Ідентифікація лікарських рослин родини Fabaceae за допомогою потенційного штрих-коду ДНК ITS2, J. Ethnopharmacol. 130 (2010) 116–121.
[19] T. Gao, H. Yao, JY Song та ін., Оцінка можливості використання штрих-кодів ДНК-кандидатів у розрізненні видів великої родини Asteraceae, BMC Evol. Biol. 10 (2010) 324.
[20] XH Pang, JY Song, YJ Zhu та ін., Використання штрих-кодування ДНК для ідентифікації видів у Euphorbiaceae, Planta Med. 76 (2010) 1784–1786.
[21] XH Pang, JY Song, YJ Zhu та ін., Застосування штрих-кодів ДНК рослин для ідентифікації видів Rosaceae, Cladistics 27 (2011) 165–170.
[22] П.Д. Геберт, Е.Х. Пентон, Дж.М. Бернс, Д.Х. Янзен, В. Халвакс, Десять видів в одному: штрих-кодування ДНК розкриває загадкові види в неотропічному метелику-шкіпері Astraptes fulguration, Proc. Natl. акад. Sci. США 101 (2004) 14812–14817.
[23] MW Chase, RS Cowan та ін., Пропозиція щодо стандартизованого протоколу штрихового кодування всіх наземних рослин, Taxon 56 (2007) 295–299.
[24] В. Дж. Кресс, Д. Л. Еріксон, Глобальний штрих-код ДНК із двома локусами для наземних рослин: кодуючий ген rbcL доповнює некодуючу спейсерну область trnH-psbA, PloS One 2 (2007) e508.
[25] DL Erickson, J. Spouge, A. Resch та ін. Штрих-кодування ДНК наземних рослин: розробка стандартів для кількісної оцінки максимального успіху, Taxon 57 (2008) 1304–1316.
[26] NC Kane, Q. Cronk, Botany without borders: barcoding in focus, Mol. Ecol. 17 (2008) 5175–5176.
[27] R. Lahaye, M. van der Bank, D. Bogarin та ін., Штрих-код ДНК флори гарячих точок біорізноманіття, Proc. Natl. акад. Sci. США 105 (2008) 2923–2928.
[28] N. Kane, S. Sveinsson, H. Dempewolf та ін., Ультраштрихове кодування в какао (Theobroma spp.; Malvaceae) з використанням цілих геномів хлоропластів і ядерної рибосомної ДНК, Am. Дж. Бот. 99 (2012) 320–329.
[29] JD Thompson, TJ Gibson, F. Plewniak, F. Jeanmougin, DG Higgins, Інтерфейс вікон CLUSTAL_X: гнучкі стратегії для вирівнювання кількох послідовностей за допомогою інструментів аналізу якості, Nucleic Acids Res. 25 (1997) 4876–4882.
[30] TA Hall, BioEdit: зручний для користувача редактор вирівнювання біологічної послідовності та програма аналізу для Windows 95/98/NT, Nucl. Кислоти Symp. Сер. 41 (1999) 95–98.
[31] С. Кумар, М. Ней, Дж. Дадлі, К. Тамура, MEGA: орієнтоване на біологів програмне забезпечення для еволюційного аналізу послідовностей ДНК і білків, Коротка інформація. Біоінформ. 9 (2008) 299–306.
[32] PF Tu, B. Wang, T. Deyama, ZG Zhang, ZC Lou, Аналіз фенілетаноїдних глікозидів Herba cistanchis методом RP-HPLC, Acta Pharm. Сініка. 32 (1997) 294–300.