Антимеланогенез і антитирозиназні властивості Pistacia atlantica subsp. mutica на клітинах мишачої меланоми B16F10

Контакт: ali.ma@wecistanche.com

Саміра Егбалі-Феріз1, Акрам Талегані2, Хаді Аль-Наджар3, Сейєд Ахмад Емамі1, Хома Рахімі4, Джавад Асілі1, Саміра Хасанзаде1 та Захра Таярані-Наджаран5,*

Анотація:Фістація атлантична (P. atlantica) subsp. mutica використовується в традиційній медицині і славиться своїми лікувальними властивостями. Метою цього дослідження було оцінити вплив метанолу (MeOH), н-гексану, дихлорметану (CH2Cl2), н-бутанолу (BuOH), етилацетату (EtOAc), водних екстрактів та ефірної олії P. atlantica subsp. mutica на синтез меланіну та окислювальний стрес у лінії клітин меланоми B16F10. Життєздатність клітин B16F10 після обробки зростаючими концентраціями різних екстрактів рослини (0.2-200 мкг/мл) вимірювали за допомогою резазурину. Склад ефірної олії було визначено методом газової хромато-мас-спектрометрії (ГХ-МС) та інгібуючий вплив на синтез меланіну, грибівтирозиназаколориметричним та флуорометричним методами оцінювали активність клітинної тирозинази та окислювальний стрес. Дані показали, що екстракти в концентраціях 0.2-200 мкг/мл не виявили значної токсичності для клітин меланоми, але концентрації 200 мкг/мл ефірної олії мали цитотоксичний ефект. Pistacia atlantica subsp. mutica може пригнічувати грибтирозиназадіяльність. Також зменшилася кількість меланіну в клітинах B16F10. Крім того, здатність P. atlantica subsp. екстракти mutica у зниженні кількості активних форм кисню в клітинах меланоми показали дивовижніантиоксидантдіяльність. Крім того, у цьому дослідженні всі концентрації ефірної олії не мали значного ефекту. Theмеланогенезгальмівний іантиоксидантефекти P. atlantica subsp. mutica на клітинах B16F10 може свідчити про потенційну відбілюючу дію рослини для використання в дерматологічних продуктах по догляду за шкірою та для запобігання старінню шкіри в косметичній промисловості.Ключові слова:анти-тирозиназа; Меланогенез; P. atlantica subsp. mutica.

Натисніть, щобцистанч корисний як антиоксидант

ВСТУП

Меланін — це пігмент шкіри, який синтезується в меланосомах і передається кератиноцитам під час фізіологічного процесу, який називаєтьсямеланогенез. Меланін відіграє важливу роль у захисті від ультрафіолетових променів і визначає колір шкіри, волосся та очей. Надмірне виробництво меланіну пояснюється меланомою та аномальною пігментацією шкіри (1-3). Ключовим ферментом у біосинтезі меланіну є тирозиназа, яка каталізує дві окремі реакції: окислення 3,4-дигідроксифенілаланіну (ДОФА) до допахінону та гідроксилювання L-тирозину до ДОФА (4).Тирозиназаабо поліфенолоксидаза - це мідьвмісний фермент зі змішаною функцією, який зустрічається в мікроорганізмах, тваринах і рослинах (5). Тирозиназа є найбільш впливовим фактором для потемніння фруктів і овочів. Надмірне виробництво та накопичення меланіну може призвести до великої кількості захворювань шкіри, включаючи мелазму, веснянки, сонячний меланоз та вікові плями (6). томутирозиназаінгібітори викликають великий інтерес у харчовій і косметичній промисловості. У багатьох живих організмах окислення має важливе значення для виробництва енергії для живлення біологічних процесів.

Однак перекис водню (H2O2) та інші активні форми кисню (АФК) спричиняють загибель клітин і пошкодження тканин у багатьох фізіологічних і патологічних явищах, включаючи збільшення АФК після УФ-опромінення під час процесу меланогенезу. Крім того, добре відомо, що спричинене УФ-випромінюванням виробництво АФК бере участь у патогенезі кількох захворювань шкіри, включаючи старіння, зморшки, світлочутливість та злоякісні пухлини (7). Таким чином, знаходячи природні джерелаантиоксидантиз анти-тирозиназадіяльність допомагає змінити пошкодження шкіри, пов'язані з надлишкоммеланогенез (4).

Рід Pistacia є членом сімейства Anacardiaceae, що включає близько 9 видів і здебільшого поширений у Середземноморському регіоні, Європі та деяких частинах Азії (8, 9). Фістація атлантична (P. atlantica)Desf. має 3 підвиди, а саме: P. atlanticasubsp. kurdica (Zohary) Реч. f., P. atlanticasubsp. mutica (Fischer & CA Meyer) Rech. f. та P. atlantica subsp. cabulica (Запаси) Реч. f. Три згадані підвиди P. atlantica, P. khinjuk Stocks і P. vera L. вирощуються в Ірані (10). Плоди P. atlanticasubsp. mutica, а саме Baneh, має округлу або овальну форму діаметром 0.5-0.7 см. Антиоксидантна та протипухлинна активність оболонки P. atlantica була пов’язана з високим загальним вмістом фенолів у рослині. P. atlantica традиційно використовувався для полегшення дискомфорту та болю у верхній частині живота, диспепсії та виразкової хвороби (11-13). Проте немає досліджень інгібіторної активності P. atlantica subsp. mutica. Отже, у цьому проекті ми вибираємо клітини меланоми B16F10 для вивчення антиоксидантних і антимеланогенних властивостей P. atlantica subsp. екстракти мутики. Метою цього дослідження було дослідити інгібуючу дію метанолу (MeOH), н-гексану, дихлорметану (CH2Cl2), н-бутанолу (BuOH), етилацетату (EtOAc), водних (H2O) екстрактів та ефірної олії P. atlanticasubsp. mutica плід намеланогенезі оцінити потенціалантиоксидантздатність рослини до клітин меланоми B16F10.

МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ

Хімікалії

Грибтирозиназаз Agaricus bisporus, койєва кислота, резазурин, L-3,4-дигідроксифенілаланін (L-DOPA), дихлордигідрофлуоресцеїн діацетат (DCFH-DA), егтазинова кислота (EGTA), диметилсульфоксид (DMSO) ), фенілметилсульфонілфторид, гліцерофосфат, -меркаптоетанол, забуферений фосфатом фізіологічний розчин (PBS), ортованадат натрію, трисбуферний фізіологічний розчин Твін 20 (TBST), придбаний у Sigma (США). Ембріональна сироватка великої рогатої худоби (FBS), пеніцилін, стрептоміцин і трипсин-EDTA були отримані від GibcoBRL (Grand Island, США). Лінія клітин меланоми (B16F10, кат. № C540) була придбана в Інституті Пастера в Ірані (Тегеран, Іран). Всі інші хімікати та розчинники були від Merck (Німеччина).

Приготування екстрактів

P. atlantica subsp. mutica була зібрана в травні 2014 року в горах Бардаскан, провінція Хорасан-Разаві, на північному сході Ірану, і ідентифікована пані М. Сузані. Зразок ваучера (№: 13069) було збережено в гербарії Школи фармації Мешхедського університету медичних наук, Мешхед, Іран. Незрілі плоди P. atlantica subsp. mutica (200 г) подрібнювали блендером (Toos chekan Co, IR Іран), а потім перколювали MeOH при кімнатній температурі протягом 24 годин згідно з раніше зареєстрованим протоколом (14). Після екстракції розчинник випарювали за допомогою роторного випарника, а потім ліофільно сушили. Метанольний екстракт (94 г) далі фракціонували шляхом розподілу розчинник-розчинник з отриманням п’яти різних фракцій, включаючи MeOH, н-гексан, CH2Cl2, BuOH, EtOAc і H2O.

Виділення ефірної олії

Незрілі плоди P. atlantica subsp.mutica (150 г) піддавали гідродистиляції в апараті типу Клевенджера протягом 3 год. Безбарвне масло було отримано з виходом 0,8 відсотка (об./мас.). Отриману ефірну олію сушили над безводним сульфатом натрію і зберігали при 4 градусах у темряві до подальшого тестування.

Газова хроматографія та газова хромато-мас-спектрометрія

Аналіз газової хроматографії (ГХ) проводили за допомогою Varian CP{{0}}, оснащеного детектором FID, сполученого з колонкою з плавленого кремнезему (CP-Sil 8CB, 50 м × 0,25). мм, товщина плівки 0,12 мкм) за таких умов: температура печі 50-250 градус зі швидкістю 3 градуси/хв; температура інжектора 260 градусів, співвідношення розподілу 1:5, з газом-носієм, швидкість потоку N2 2 мл/хв; температура детектора 280 градусів.

Мас-аналіз методом газової хроматографії (ГХ-МС) проводили за допомогою приладу Agilent 5975, оснащеного колонкою HP-5 MS (30 м × 0.25 мм внутрішнім діаметром, {{ 14}}.25 мкм товщиною плівки), сполучених із чотирикратним масовим детектором і комп’ютером, оснащеним бібліотекою Wiley 7n.L. Температура печі 50-250 градус зі швидкістю 3 градуси/хв, температура інжектора 250 градусів, об’єм ін’єкції: 0,1 мкл, розділене впорскування з коефіцієнтом розподілу 1:50, зі швидкістю потоку газу-носія (гелію) 1 мл/ хв., джерело іонів: 70 еВ, струм іонізації: 150 мкА та діапазон сканування: 35-465. Ідентифікація компонентів ефірної олії була заснована на газовій хроматографії затримки, отриманої з посиланням на серію н-алканів (C6-C20) на колонці HP-5MS, порівняння їх мас-спектрів і моделей фрагментації. в літературі та комп’ютерне зіставлення з бібліотекою Wiley 7n.L (15). Кількісне визначення відносної кількості окремих компонентів незрілих плодів проводили методом відсотка площі без урахування калібрувального коефіцієнта.

Культура клітин

Лінія клітин меланоми, B16F10, підтримується при 37 градусах у зволоженій атмосфері (90 відсотків), що містить 5 відсотків CO2. Клітини культивували в RPMI-1640 (Bioidea, Іран) з 10% (об./об.) FBS, 100 МО/мл пеніциліну та 100 мкг/мл стрептоміцину. Матковий розчин P. atlantica subsp. mutica готували при 50 мкг/мл в ДМСО і зберігали при -40 градусах. Як позитивний контроль у всіх експериментах використовували койєву кислоту (2 і 4 мМ). Клітини культивували в 96-лункових планшетах із щільністю 105 клітин/мл. Активність екстракту в кожному експерименті розраховували за допомогою наступного рівняння:

відсоток активності=Поглинання зразка/Абсорбція контролю*100

Дослідження життєздатності клітин

Резазурин є індикатором здоров'я клітин, який використовує відновну здатність живої клітини та перетворюється на резоруфін. Резазурин - це синя, нетоксична, нефлуоресцентна та проникна для клітин сполука, яка перетворюється на червоний колір і сильно флуоресцентний резоруфін у живих клітинах (16). Приблизно 104 клітини меланоми B16F10 посіяли в кожну лунку 96-мікропланшета та обробили різними концентраціями екстрактів та ефірної олії P. atlantica subsp. mutica (0.2-200 мкг/мл). Після 4 годин інкубації абсорбцію резазурину та резоруфіну вимірювали при 570 нм та 600 нм за допомогою гібридного мультирежимного пристрою для зчитування мікропланшетів H4 (BioTek, Winooski, США). Кожен експеримент проводили в трьох повторах. Напівмаксимальну інгібуючу концентрацію (IC50) розраховували за допомогою програмного забезпечення GraphPad за кривою концентрація-ефект: логарифм концентрації проти реакції.

Визначення активності тирозинази грибів

Діяльність грибатирозиназав окисленні L-DOPA вимірювали спектрофотометрично, як описано раніше (17), з деякими модифікаціями. Коротко, 160 мкл 5 мМ L-DOPA (у 100 мМ натрій-фосфатному буфері рН 6,8) і 20 мкл того самого буфера з P. atlanticasubsp. екстракти mutica та ефірну олію (10-1000 мкг/мл) змішували з 20 мкл грибної тирозинази (200 одиниць/мл), а потім інкубували при 37 градусах протягом 30 хвилин. Оптичну густину вимірювали при 475 нм за допомогою Synergy H4 Hybrid Multi-Mode microplate reader (BioTek, Winooski, USA).

Визначення вмісту меланіну в клітинах меланоми

Клітини меланоми, B16F10, висівали з щільністю 105 клітин на лунку в 96-лункові культуральні планшети та інкубували протягом 24 годин. Потім їх інкубували з різними концентраціями (0.2-200 мкг/мл) P. atlantica subsp. екстрактів мутики та ефірної олії протягом 24 год. Вміст меланіну вимірювали, як описано раніше (18). Після обробки клітини збирали за допомогою трипсину. Їх промивали PBS. Осад клітин розчиняли в 50 мкл розчину гідроксиду натрію (2 М) протягом 60 хвилин при 60°. Вміст меланіну вимірювали шляхом вимірювання поглинання при 405 нм за допомогою гібридного мультирежимного зчитувача мікропланшетів Synergy H4 (BioTek, Winooski, США).

Визначення активності клітинної тирозинази

Окислення DOPA до DOPA хрому аналізували за допомогою спектрофотометрії як показниктирозиназадіяльність (18). 106 клітин меланоми B16F10 поміщали в кожну лунку 96-лункового планшета на ніч. Після обробки клітин різними концентраціями (0.2-200 мкг/мл) P. atlantica subsp. екстракти mutica та ефірну олію протягом 24 год. Клітини відокремлювали за допомогою трипсину; промивають PBS і лізують 50 мкл натрій-фосфатного буфера (pH 6,8, 100 мМ), що містить 1 відсоток тритону X-100 і 0,1 мМ фенілметилсульфонілфториду. Лізати центрифугували при 10,000 об/хв протягом 20 хв при 4 градусах. 100 мкл кожного лізату (кожен містить 100 мг білка) змішували з 30 мкл 5 мМ DOPA в 96-лунковому планшеті та інкубували при 37 градусах протягом 2 годин, оптичну густину вимірювали при 475 нм за допомогою гібридного мультирежимного пристрою для зчитування мікропланшетів Synergy H4. (BioTek, Winooski, США).

Визначення рівня активних форм кисню в клітинах

Рівень активних форм кисню вимірювали, як описано раніше з незначними модифікаціями (19). Клітини меланоми, B16F10, (2 × 104) висівали в 96-лункові планшети протягом ночі, а потім обробляли різними концентраціями (0.2-200 мкг/мл) P. atlantica subsp. . екстрактів мутики та ефірної олії протягом 24 год. Потім клітини інкубували з 50 мкл H2O2 (24 мМ) при 37 градусах протягом 30 хвилин. Потім до клітин додавали 50 мкл DCFH-DA та вимірювали інтенсивність флуоресценції DCF при випромінюванні 504 нм і збудженні при 524 нм за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів Synergy H4 (BioTek, США).

Вестерн-блоттинг

Клітини меланоми, B16F10, культивували в колбах об’ємом 75 см3 з метанольним екстрактом і без нього (0.5-100 мкг/мл) протягом 24 годин. Потім клітини лізували в буфері (50 мМ трис-HCl, pH 7,4, 2 мМ EGTA, 1 мМ фенілметилсульфонілфторид, 10 мМ гліцерофосфат, 10 мМ -меркаптоетанол, 1 мМ ортованадат натрію, 0,1% дезоксихолевої кислоти натрієва сіль). Рівну кількість білків (50 мкг) завантажували на 12-відсотковий додецилсульфат натрію (SDS)-поліакриламідний гель для електрофорезу та переносили на мембрани з полівінілідендифториду. Мембрани блокували протягом 2 годин у 10% знежиреному молоці в буфері TBST (20 мМ трис-HCl рН 7,4, 100 мМ NaCl і 0,1% Твін 20) при кімнатній температурі. Після промивання буфером TBST мембрану потім інкубували протягом ночі з первинним антитілом: 1:300 (кролячі анти-тирозиназаантитіло (Santa Cruz Biotechnology, CA)). Після триразового промивання буфером TBST мембрани інкубували протягом 2 годин з анти-кролячим IgG (1:2000) як вторинним антитілом (клітинний сигнал). Промивання 3 рази буфером TBST було повторено, і білкові смуги були виявлені за допомогою покращеної хемілюмінесцентної (ECL) системи прайм-вестерн-блоттингу (BioRaD, США) (20). Як контроль навантаження використовували анти{7}}актинове антитіло.

Статистичний аналіз

Відносні результати експериментів були представлені як середнє значення ± SD трьох незалежних вимірювань. Аналіз дисперсії та розрахунок IC50 проводили за допомогою GraphPad Prism 6.0 за допомогою одностороннього тесту ANOVA, а середні значення порівнювали за допомогою тестів Даннета. Р <0,05 означає="" статистично="" значущу="" різницю="" між="" клітинами,="" обробленими="" екстрактом,="" і="" контролем.="" для="" порівняння="" ефекту="" різних="" екстрактів="" у="" кожному="" аналізі="" використовували="" двосторонній="" тест="" anova="" та="" посттест="" порівняння="">

РЕЗУЛЬТАТИ

Склад ефірних масел

Газова хроматографія була використана для кількісного визначення та Gc-маса для ідентифікації сполук. Результати як ГХ, так і ГХ-МС аналізу представлені в таблиці кількісної та якісної ідентифікації сполук. У випадку P. atlanticasubsp. mutica, в ефірній олії було ідентифіковано 68 компонентів, що становило 99,8% від загального складу олії (табл. 1). Згруповані сполуки ефірної олії були визначені як монотерпенові вуглеводні 86.5 відсотка, оксигеновані монотерпени 3,7 відсотка, сесквітерпенові вуглеводні 8,7 відсотка, оксигеновані сесквітерпени 0.1 відсоток та інші 0 .8 відсотків . Основними компонентами ефірної олії були -E-оцимен 29,7 відсотка, мірцен 17,1 відсотка, -Z-оцимен 17.0 відсотків, -пінен 10,2 відсотка та E-каріофілен 7,1 відсотка.

Вплив екстрактів на виживання клітин

Життєздатність клітин контролювали за допомогою резазурину. Клітини меланоми, B16F10, були висіяні в 96-лунковий планшет. Через 24 години клітини обробляли різними концентраціями (0.2-200 мкг/мл) P. atlantica subsp. mutica, результати показали, що екстракти не мали значного цитотоксичного ефекту на клітини B16F10 у концентраціях, використаних у цьому дослідженні (рис. 1). Доксорубіцин як позитивний контроль істотно індукував загибель клітин (P <>

Вплив екстрактів на активність тирозинази грибів

Було оцінено вплив P. atlantica на інгібування тирозинази гриба при окисленні L-DOPA. Результати показали, що грибтирозиназаактивність пригнічувалася всіма різними екстрактами, але концентрація 1000 мкг/мл екстракту н-гексану не мала істотного впливу в цьому тесті. Як позитивний контроль використовували койєву кислоту (2 і 4 мМ) (Р <0,05) (рис.="">

Вплив екстрактів і ефірної олії на синтез меланіну

Для вивчення дії різних екстрактів та ефірної олії P. atlantica subsp. mutica на синтез меланіну, було оцінено вміст меланіну в клітинах меланоми B16F10, оброблених екстрактом. Як позитивний контроль використовували койєву кислоту (2 і 4 мМ).

Результати показали, що екстракти MeOH, CH2Cl2 і EtOAc (0.2-200 мкг/мл), н-гексан (2-200 мкг/мл) і екстракт H2O (2{{9 }} та 200 мкг/мл) мали інгібуючу дію на синтез меланіну (P <0,05) (рис.="" 3).="" проте="" всі="" концентрації="" ефірної="" олії="" та="" екстракту="" buoh="" не="" мали="" значного="" інгібуючого="" впливу="" на="" синтез="" меланіну.="" результати="" використання="" ефірної="" олії="" на="" малюнках="" не="">

Вплив екстрактів на активність клітинної тирозинази

Для оцінки механізму інгібуючої дії P. atlantica subsp. mutica екстракт намеланогенеззокрема, ми оцінили внутрішньоклітиннийтирозиназаактивності в клітинах меланоми B16F10. Результати показали, що екстракти MeOH, EtOAc і BuOH (0.2-200 мкг/мл), н-гексан (0.2 мкг/мл) і CH2Cl2 (20 і 200 мкг/мл) екстракти P. atlantica subsp. mutica міг істотно інгібувати активність клітинної тирозинази (P <0,05) (рис.="" 4),="" але="" водний="" екстракт="" не="" мав="" інгібуючої="" дії="" на="" активність="" клітинної="">

Вплив екстрактів на клітинний рівень активних форм кисню

Внутрішньоклітинний рівень ROS як показникантиоксидантємність P. atlantica subsp.mutica вимірювали в клітинах, оброблених 24 мМ H2O2 окремо або різними екстрактами в клітинах меланоми B16F10. Результати показали, що всі екстракти концентрації P. atlanticasubsp. mutica, за винятком 0.2 мкг/мл екстракту CH2Cl2 може значно пригнічувати окислювальний стрес, індукований H2O2 (P < 0,05)="" (рис.="">

Вплив екстрактів на рівень білка клітинної тирозинази

Внутрішньоклітинна дія P. atlanticasubsp. mutica на меланогенних споріднених білках, таких як тирозиназа, як індикатормеланогенезоцінювали Вестерн-блот. Як показано на рис. 6,тирозиназарівні білка були значно знижені P. atlantica subsp. лікування екстрактом mutica в концентрації {{0}}.5 і 10 мкг/мл (P <0,05). -="" актин="" використовувався="" як="" внутрішній="">

Вплив ефірної олії на різні параметри

Ефірна олія в 0.2-200 мкг/мл не виявила істотного впливу на всі вищезазначені параметри, за винятком концентрації 200 мкг/мл, яка виявила цитотоксичну дію на клітини меланоми. Таким чином, результати ефірної олії не включені в розділ результатів, оскільки не спостерігалося інгібуючих ефектів.

ДИСКУСІЯ

Косметичні засоби на натуральній основі широко рекламуються комерційними агентствами за їх безпечність і багатофункціональність. Пошук нових антимеланогенних засобів сантиоксидантактивність з природних джерел є одним із інтересів у формулюванні продуктів, які використовуються для розладів гіперпігментації. У медичних і косметичних продуктах, що використовуються як відбілювачі шкіри, інгібування утворення меланіну, поглинання вільних радикалів і інгібуваннятирозиназаактивність, яка важлива для лікування пов’язаних шкірних захворювань (21).

У цьому дослідженні антиоксидантна активність різних екстрактів P. atlantica subsp. mutica було оцінено та проаналізовано їх вплив на активність тирозинази та синтез меланіну. МеОН і EtOAc екстракти P. atlantica subsp. mutica показав значнийантиоксидантактивність при 2,20 мкг/мл і 20,200 мкг/мл, що можна віднести до поліфенолів і флавоноїдів, які широко містяться в рослині. Результати показали, що всі екстракти, особливо екстракти MeOH, EtOAc і H2O, можуть значно пригнічувати розвиток гриба.тирозиназадіяльність. Крім того, екстракти MeOH, EtOAc і BuOH були здатні знизити активність клітинної тирозіани, що відповідало зниженню виробництва меланіну в клітинах. У цьому дослідженні всі концентрації ефірної олії не мали значного інгібуючого ефекту проти клітинної тирозіази, синтезу меланіну таантиоксидантдіяльність. Через більшу активність екстракту MeOH у різних експериментах порівняно з іншими екстрактами ми обрали згаданий екстракт для вестерн-блот аналізу. Таким чином, антимеланогенний ефект цього екстракту був підтверджений у всіх аналізах на клітинах B16F10, порівнянний з позитивним контролем койєвої кислоти (таблиця 2).

Екстракти MeOH, CH2Cl2 і EtOAc зменшили кількість клітинтирозиназаактивності, вмісту меланіну та АФК. Фракції напівполярної природи можуть витягувати фітохімічні речовини, які відповідають за антимеланогенну активність, такі як поліфеноли та флавоноїди. Фракція н-гексану та ефірна олія були менш активними, що свідчить про те, що рослинні фітохімічні речовини з неполярною та летючою природою не мають значного впливу намеланогенезпроцесу (22,23).

Поліфеноли та флавоноїди діють як інгібітори виробництва АФК і можуть відповідати за антимеланогенні властивості рослинних екстрактів (24-27). Основні сполуки в екстракті P. atlantica subsp. mutica є кверцетин, лютеолін, ізокверцетин, рутин, лютеоліну 7-лактат і фенольні сполуки, такі як р-кумарова кислота, кавова кислота та галова кислота, які відповідають заантиоксидантдіяльність (28). Повідомлялося, що рутин пригнічує активність тирозинази та є потужним антипігментним засобом завдяки наявності гідроксильних груп (29). Цікаво, що кверцетин, лютеолін і ізокверцетин також мають багато гідроксильних груп у своїй структурі, що робить їх придатними для взаємодії з тирозиназою, що призводить до антитирозиназної активності (21,30). Нещодавно було показано, що ефекти флавоноїдів, таких як лютеолін і кверцетин, в основному опосередковуються через модуляцію фактора транскрипціїмеланогенез-асоційований фактор транскрипції (MITF) та/або ферменти меланогенезутирозиназа, DCT або споріднений з тирозиназою білок 1 (TYRP-1) (31). P-кумарова кислота та кавова кислота пригнічували активність тирозинази грибів і були в 10- і 3-разів сильнішими, ніж койєва кислота (32).

Галова кислота демонструє інгібіторну дію на тирозиназу та відновлює допахінон назад до L-DOPA через окисно-відновний цикл, подібно до аскорбінової кислоти (33). Подібним чином, у цьому дослідженні P. atlantica subsp. mutica знизив рівень білка тирозинази в клітинах, що сильно корелює з наявністю в рослині кверцетину, лютеоліну, ізокверцетину, рутину та інших поліфенолів.

Є багато повідомлень про рослини, які мають антимеланогенну та антиоксидантну активність, яка зменшує окислювальний стрес, що може мати високий потенціал для лікування шкірних захворювань. Наприклад, різні екстракти надземних частин P. atlantica зменшили окислювальний стрес, що можна пояснити поліфенолами, флавоноїдами та антоціаном, які широко містяться в рослині (34). В іншому дослідженні екстракт MeOH P. vera зменшив секрецію меланіну, що приписувалося деякимантиоксидантсполук у цій рослині. Це дослідження показало, що койєва кислота як позитивний контроль показала значення IC50 0,05 мг/мл, а вищі концентрації P. vera можна використовувати як ефективний засіб для лікування шкірних захворювань, таких як рак меланоми (35 ). Gourine та ін. показали, що надземні частини P. atlantica мають потужні антиоксидантні властивості (36). Крім того, фракції MeOH і CH2Cl2 Nepeta satureioide вказують на потенційний вплив проти вироблення меланіну в клітинах меланоми B16F10 і можуть сприяти косметичним рецептам засобів по догляду за шкірою (37). Похідні койєвої кислоти проявляли інгібуючу дію натирозиназа. Схоже, що наявність у цій сполукі вільної гідроксильної групи та метильного замінника підтверджує інгібіторну активність. У цьому дослідженні койєва кислота (позитивний контроль) показала значення IC50 0.28 мМ (38). Фенілпропаноїдні глікозиди та флавоноїди, виділені з Teucrium polium L. var. gnaphalodes показали антиоксидантну та інгібіторну дію на тирозиназу. Автори показали, що яранол показав найвищу інгібіторну активність щодо тирозинази (IC50 0.041 мМ), а поліумозид був найкращим антиоксидантом серед досліджуваних сполук. Койєва кислота показала значення IC50 0,02 мМ (39).

Зниження рівня білкатирозиназавід P. atlantica subsp. mutica іантиоксидантвластивості та знижені АФК підтвердили використання цього агента як засобу проти меланогенезу. У цьому дослідженні вперше визначено інгібуючу дію P. atlanticasubsp. mutica намеланогенезв клітинах меланоми B16F10. Щоб запобігти накопиченню та надмірному виробленню меланіну в шкірі, інгібуваннятирозиназамає важливу роль. Отже, щодо антиоксидантного ефекту P. atlantica subsp.mutica, про який повідомляється, флавоноїди та фенольні сполуки є важливими компонентами рослини, відповідальними за антимеланогенез і антитирозиназну активність P. atlantica subsp. mutica. Як антиоксидантна, так і антимеланогенна активність P. atlantica subsp. mutica може запропонувати відповідний засіб для відбілювання шкіри та може бути включений до косметичних продуктів для догляду за шкірою.

ВИСНОВОК

На завершення це дослідження вперше показало, що екстракти MeOH і EtOAc P. atlantica subsp. mutica має сильнийтирозиназаінгібіторна активність, що відповідає зниженню рівня меланіну. Крім того, P. atlanticasubsp. mutica також продемонструвала високу активність поглинання іантиоксидантвластивості, які можна пояснити головним чином високим рівнем флавоноїдів і загальних поліфенолів. Результати показали, що здатність P. atlanticasubsp. mutica для зменшення вироблення меланіну може корелювати з виснаженням клітинних АФК та ​​її інгібіторною дією на сигнальний шлях, що регулюєтирозиназадіяльність. Оскільки семіполярний екстракт мав значні антитирозиназні та анти-меланогеннийтому ми робимо висновок, що сполуки, відповідальні за ці ефекти, накопичуються в екстракті, а не в ефірних оліях.