Антиоксидантна активність Lactobacillus Plantarum NJAU-01 у моделі старіння на тваринах

Будь ласка зв'яжітьсяoscar.xiao@wecistanche.comдля отримання додаткової інформації

Анотація

фон:Надлишок активних форм кисню (АФК) може завдати серйозної шкоди організму людини та викликати різні хронічні захворювання. Дослідження виявили, що молочнокислі бактерії (LAB) мають антиоксидантну дію та діють проти старіння, а також є важливими джерелами для розвитку мікробних антиоксидантів. Ця стаття полягала в дослідженні потенційної ролі антиоксидантного штаму Lactobacillus plantarum NJAU-01, виділеного з традиційного в’яленого м’ясного продукту Jinhua Ham, у регулюванні індукованого D-галактозою підгострого старіння мишей. Загалом 48 мишей Kun Ming, вільних від специфічних патогенів (мишей SPF KM), випадковим чином розподілили на 6 груп: контрольна група з ін’єкцією стерильного фізіологічного розчину, група старіння з підшкірною ін’єкцією D-галактози, групи лікування з ін’єкцією D-галактози та внутрішньошлунковим введенням 10', 10 градусів і 10 градусів FU/мл L.plantarum NJAU-01, і група позитивного контролю з ін’єкцією D-галактози та внутрішньошлунковим введенням 1 мг/мл вітаміну С.

Результати:Результати показали, що група лікування L. plantarum NJAU-01 при 10 градусах FU/мл показали вищу загальну антиоксидантну здатність (T-AOC) і антиоксидантну ферментативну активність супероксиддисмутази (SOD), глутатіонпероксидази (GSH-Px) і каталази (CAT), ніж ті інших груп у сироватці, серці та печінці. Навпаки, вміст маркера окисного стресу малонового діальдегіду (MDA) показав нижчі рівні, ніж в інших групах (P<0.05). the="" antioxidant="" capacity="" was="" improved="" with="" the="" supplement="" of="" the="" increasing="" concentration="" of="" l.="" plantarum="">

Натисніть тут, щоб дізнатися більше

Висновки:Таким чином, це дослідження демонструє, що L plantarum NJAU-01 може полегшити окислювальний стрес шляхом підвищення активності ферментів, залучених до стійкості до окислення, і зниження рівня окислення ліпідів у мишей. Ключові слова: Lactobacillus Plantarum NJAU-01, Jinhua Halm, старіння тварин, спричинене D-галактозою, малоновий діальдегід, антиоксидантна здатність

Фон

Окислення - це процес, необхідний для клітинного метаболізму в організмі. Активні форми кисню (АФК) у вигляді вільних радикалів, що утворюються в результаті ендогенних реакцій окислення-відновлення (REDOX), були відповідальними за окислення. Однак, коли клітини отримують зовнішні подразники, викликані окислювальним стресом, надмірне виробництво АФК переважає здатність клітин поглинати АФК [1]. Дані деяких досліджень показали, що окислювальний стрес пов’язаний із тривалістю життя організмів. [2] Нездатність метаболізувати залишки АФК може завдати серйозної шкоди людському організму та викликати різні хронічні захворювання, пов’язані зі старінням, такі як діабет, хвороби серця, високий рівень ліпідів у крові, артрит, нейродегенеративні захворювання, серцево-судинні та цереброваскулярні захворювання [3]. Зазвичай в організмі є серія ферментів або неферментів і систем відновлення, які беруть участь у антиоксидантному захисті та захищають їх від окисного пошкодження [4-6]. Наприклад, аскорбінова кислота споживає кисень шляхом самоокислення, відновлюючи іони металів для зниження окисно-відновного потенціалу та залучаючись до антиоксидантного захисту [7]. Супероксиддисмутаза (СОД) здатна перетворювати шкідливі супероксидні радикали в пероксид водню [8]. Каталаза (CAT) бере участь у антиоксидантному захисті клітин шляхом розкладання перекису водню, тим самим запобігаючи реакції Фентона від утворення вільних гідроксильних радикалів [9]. Однак надлишок АФК може призвести до окисного пошкодження, спричиненого багатьма факторами, такими як опромінення (рентгенівське, у-промені, ультрафіолетове), хімічні реагенти (іони металів, HONO, HOCl та HOBr), ліки та їхні метаболіти та навіть куріння. Цих природних антиоксидантних систем в організмі часто недостатньо для запобігання окисного пошкодження, тому потрібні антиоксидантні добавки, такі як астаксантин і фолієва кислота [10]. Таким чином, пошук доступного підходу, який може полегшити або пригнічувати окисне пошкодження клітин, привернув значну увагу.

Молочнокислі бактерії (МКБ) були широко знайдені та використовуються у ферментованих м’ясних продуктах. Окрім покращення поживних речовин, смаку та збереження ферментованої їжі, LAB також має додаткові пробіотичні властивості [11, 12]. Деякі дослідження показали, що LAB мають антиоксидантну та антивікову дію, а також є важливими ресурсами для розвитку мікробних антиоксидантів [13]. Наприклад, виявлено, що лактобактерії, виділені з китайського домашнього лікеру, ефективно зменшують перекисне окислення ліпідів і покращують ліпідний обмін завдяки високій здатності поглинати холестерин і здатності до адгезії клітин кишечника людини [14]. Раніше ми виділили та перевірили молочнокислі бактерії за загальною антиоксидантною здатністю з шинки Jinhua та ідентифікували їх як Lactobacillus plantarum шляхом виявлення біохімічних характеристик, колоніальної морфології та секвенування 16 s рДНК, названого L. plantarum NJAU{{10} } [15]. L. plantarum NJAU-01 продемонстрував чудову здатність поглинати та зменшувати вільні радикали DPPH, вільні радикали гідроксилу та вільні радикали супероксидного аніону in vitro [16]. У клітинній моделі, поєднаній з електрохімічним сенсором, здатність макрофага RAW264.7 у відповідь на окислювальний стрес була значно посилена шляхом інкубації з L. plan-tarum NJAU-01 [15].Екстракт цистанхе проти радіаціїКрім того, Л. plantarum NJAU-01 також може зменшити ступінь окислення білків у ферментованій ковбасі [17]. Таким чином, Л. plantarum NJAU-01 доведено, що він має антиоксидантну дію in vitro, що є перспективним для потенційного використання для регуляції окисного стресу in vivo.

Cistanche може омолоджувати старіння

Таким чином, важливо оцінити антиоксидантну дію L. Plantarum NJAU-01 in vivo за допомогою тваринної моделі, яка може ефективно спостерігати за поглинанням, транспортуванням і метаболізмом у тварин. Миші, викликані D-галактозою, були розроблені для моделювання виникнення окисного пошкодження в процесі старіння організму протягом десятиліть [18]. D-галактоза сприяє утворенню АФК через реакцію з амінокислотами з утворенням кінцевих продуктів глікації шляхом неферментативного глікування з перевагами низької токсичності, повільного процесу окислення та відсутності летального ефекту [19,20]. Часто повідомлялося, що модель старіння мишей, індукована D-галактозою, оцінює антиоксидантну здатність пробіотиків, таких як L-карнітин, урсолова кислота та L. Plantarum AR501 [19,21,22]. Тому цих зрілих мишей, індукованих D-галактозою, старіння використовували для попереднього дослідження ролі L. plantarum NJAU-01 у знятті окислювального стресу у мишей. L. plan-tarum NJAU-01 годували мишей, індукованих D-галактозою, для оцінки його антиоксидантних ефектів in vivo шляхом вимірювання загальної антиоксидантної здатності (T-AOC), антиоксидантної ферментативної активності SOD, глутатіону пероксидази (GSH-Px) і CAT, а також вміст маркера окислювального стресу малонового діальдегіду (MDA) в сироватці, серці і печінці мишей.цистанхея трав'янаЦе стане основою для подальших досліджень щодо розробки та використання L. plantarum NJAU-01 як пробіотика.

Результати

Маса тіла та показники органів у мишей

Жодна з тварин не загинула під час періоду годування, і були включені дати всіх мишей. Вплив різних обробок L. plantarum NJAU-01 на внутрішні органи мишей наведено в таблиці 1. Миші у віковій групі, яким вводили D-галактозу, показали значно нижчу масу тіла порівняно з іншими мишами. групи (П<0.05). no="" significant="" difference="" was="" ob-served="" in="" kidney="" liver="" index="" and="" lung="" be-tween="" the="" l.="" plantarum="" njau-01="" treatment="" groups="" normal="" positive="" group="" aging="" model="" p="">0.05). Серцевий індекс групи старіючої моделі був значно вищим, ніж у нормальної групи (P<>

Активність T-AOC у сироватці, серці та печінці мишей. Активність T-AOC мишей у різних групах лікування показана на рис. 1. Активність T-AOC у модельній групі старіючих мишей становила 6,68 Од/мл, а в той час як у серці, сироватці та печінці становили 6,62, 3,55 та 3,58 Од/мг білка відповідно, що було нижчим, ніж в інших групах (P<0.05). in="" the="" l.="" plantarum="" njau-01="" lp3="" group,="" serum,="" heart,="" and="" liver="" had="" significantly="" higher="" t-aoc="" than="" the="" other="" groups=""><0.05). the="" liver="" t-aoc="" in="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" control="" group="" and="" the="" aging="" model="" group=""><0.05). however,="" the="" antioxidant="" activity="" of="" the="" heart="" and="" liver="" of="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" lp3="" group=""><0.05). the="" above="" results="" indicate="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" can="" enhance="" the="" t-aoc="" of="" the="" mice="" in="" a="" dose-dependent="">

Активність СОД в сироватці, серці та печінці мишей

Активність SOD мишей у групі моделі старіння в сироватці, серці та печінці мишей становила 16,72 Од/мл, 18,93 Од/мг білка та 44,82 Од/мг білка відповідно, що було значно нижчим, ніж у контрольній групі (P<0.05,fig.2).in contrast,the="" sod="" activity="" in="" serum,="" heart="" and="" liver="" of="" mice="" in="" vc="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" mice="" in="" the="" aging="" model="" group="" and="" control="" group=""><0.05). the="" sod="" activity="" in="" heart="" of="" mice="" lp2="" group="" was="" 61.85="" mg="" which="" not="" significantly="" different="" from="" that="" positive="" control="" p="">0.05). З іншого боку, активність СОД у сироватці крові, серці та печінці групи високої дози становила 48,83 Од/мл, 74,67 Од/мг білка та 69,55 Од/мг білка відповідно, що було значно вищим, ніж в інших групах (P<0.05). these="" results="" showed="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" could="" alleviate="" the="" oxidative="" damage="" induced="" by="" d-galactose="" to="" the="" body,="" and="" increase="" sod="">

GSH-Px у сироватці, серці та печінці мишей

Група LP3 продемонструвала вищу активність GSH-PX, ніж у мишей в інших групах, у сироватці, серці та печінці (P<0.05, fig.="" 3).="" the="" gsh-px="" activity="" in="" the="" heart="" and="" liver="" tissues="" of="" mice="" in="" the="" positive="" control="" group="" was="" signifi-cantly="" higher="" than="" that="" of="" mice="" in="" the="" control="" group="" and="" the="" aging="" model="" group=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" for="" the="" serum="" gsh-px="" activity="" between="" lp1="" and="" control="" group="" p="">0.05). Крім того, у групах моделі старіння в серці та печінці мишей було 50,39 Од/мл, 8,48 Од/мг білка та 62,67 Од/мг білка відповідно, демонструючи нижчу активність GSH-Px, ніж у інші групи (П<0.05). therefore,l.="" plantarum="" njau-01="" has="" an="" enhancing="" effect="" on="" the="" antioxidant="" enzymatic="" activity="" of="" gsh-px="" in="" mice,="" and="" the="" strain="" concentration="" is="" related="" to="" the="" antioxidant="">

Активність CAT в сироватці, серці та печінці мишей

Як показано на рис. 4, активність CAT у сироватці, серці та печінці мишей LP3 становила 22,98 ОД/мл, 137,99 ОД/мг білка та 136,31 ОД/мг білка відповідно, які мали вищу активність CAT, ніж при інших методах лікування. групи (П<0.05), indicating="" that="" the="" concentration="" of="" the="" strain="" had="" a="" marked="" effect="" on="" the="" cat="" activity.="">зростання статевого членаНавпаки, група моделі старіння показала нижчу CAT-активність, ніж активність мишей в інших групах у сироватці, серці та печінці мишей (P<0.05). as="" for="" vc="" group,="" it="" presented="" higher="" cat="" activity="" than="" the="" control="" group="" and="" aging="" model="" group="" in="" serum,="" heart="" and="" liver="" of="" mice=""><0.05). these="" findings="" demonstrate="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" can="" enhance="" the="" cat="" activity="" in="" mice="" serum,="" heart="" and="" liver="">

Вміст МДА в сироватці, серці та печінці мишей

Вміст МДА в сироватці, серці та печінці мишей у групі моделі старіння був значно вищим, ніж у контрольній групі (P<0.05, fig.="" 5).="" the="" serum="" mda="" content="" of="" mice="" in="" the="" lp3="" group="" was="" 14.29="" nmol/ml,="" and="" the="" mda="" contents="" in="" the="" heart="" and="" liver="" were="" 8.00="" and="" 26.49="" nmol/mg="" protein,="" respectively,="" being="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" other="" groups=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" mda="" content="" among="" the="" positive="" control="" lp1="" and="" lp2="" groups="" p="">0.05).

Обговорення

Модель підгострого старіння мишей шляхом індукції D-галактози широко використовується і добре відома [14,23,24]. Модель передбачає безперервне введення D-галактози, яка відновлюється до галактози галактозоредуктазою всередині клітин, що призводить до зміни осмотичного тиску між клітиною та навколишнім середовищем, а потім до набряку клітини та старіння [25]. Внутрішньоклітинні ферменти, які знімають окислювальний стрес, такі як SOD, CAT і GSH-Px, недостатні для усунення активних форм кисню, коли клітини в організмі піддаються гострому окислювальному стресу. Це прямий і ефективний метод дослідження антиоксидантної активності LAB шляхом ін’єкції LAB мишам підгострого старіння, індукованого D-галактозою, і порівняння ферментативної антиоксидантної активності, такої як SOD, GSH-Px і CAT, з контрольною групою [21].

У цьому дослідженні групу моделі старіння та групу позитивного контролю (ін’єкція Vc) порівнювали з різними дозами групи лікування L. plantarum NJAU-01. Органний індекс - це відношення маси органу в експериментальної тварини до маси його тіла, і збільшення органного коефіцієнта вказує на застій, набряк або гіперплазію органу, тоді як зменшення органного коефіцієнта вказує на атрофію органу та інші дегенеративні зміни. Індекс органів також використовувався для вираження змін у ступені старіння, про що свідчить дослідження Ю та ін. (2016) і Xu et al. (2016)[18,26]. Це дослідження показало, що миші в групі старіння моделі мали нижчу вагу та вищий серцевий індекс, ніж миші в інших групах. Введення D-галактози значно знизило антиоксидантну ферментативну активність у сироватці, серці та печінці мишей у групі старіння. Було запропоновано, що добавки L. plantarum NJAU-01 зменшують ураження печінки мишей, викликаних D-галактозою окисного стресу, регулюючи аномальну активність SOD, GSH-Px і CAT до нормального рівня. Це узгоджується з повідомленими дослідженнями при дослідженні антиоксидантної ролі цільових штамів, включаючи L. plantarum AR113 і ARS01 [12], L. del-brueckii subsp. bulgaricus F17 [27]. Таким чином, підгостра модель старіння мишей з D-галактозою в поточному дослідженні є ефективною для надання конфіденційних доказів для дослідження антиоксидантної здатності LAB in vivo.

Результати попередніх досліджень показали, що антиоксидантний механізм LAB в основному проявляється в таких аспектах: хелатовані іони металів, автотрофні антиоксидантні ферментні системи, виробництво антиоксидантних метаболітів, підвищена активність антиоксидантного ферменту господаря, контроль антиоксидантних сигнальних шляхів , та регуляції групи кишкових бактерій [28]. Ці аспекти відіграють вирішальну роль у полегшенні захворювань, розвиток яких пов’язаний з окислювальним стресом [29]. MDA вважається біомаркером перекисного окислення ліпідів, і він може призводити до зшитої полімеризації макромолекул, відіграючи потенційну роль у цитотоксичності та генотоксичності. Вміст МДА зазвичай використовується як основа для оцінки ступеня перекисного окислення ліпідів і відображення рівня пошкодження клітин [30].переваги сальси цистанчеПоточне дослідження виявило, що миші з D-галактозою-індукованим окисним стресом значно знизили рівень MDA у сироватці, серці та печінці шляхом ін’єкції L. plantarum NJAU-01, що вказує на те, що L. Plantarum може ефективно зменшувати утворення перекис ліпідів у мишей. Це узгоджується з дослідженням in vitro, яке показало ефективну здатність поглинати вільні радикали штаму L. plantarum NJAU-01 [16]. Подібним чином відлучені поросята, яких годували L. plantarum ZLP001, показали нижчий вміст MDA в сироватці (4,1 нмоль/мл), ніж контрольна група (6,23 нмоль/мл), демонструючи, що L. Plantarum ZLP001 володів антиоксидантною активністю [31]. Поточне дослідження показало, що добавки L. plantarum NJAU-01 можуть істотно зменшити ступінь окислення ліпідів у мишей, індукованих D-галактозою, захищаючи мишей від окислювального стресу.

В організмі існує набір ферментних захисних систем, які поглинають вільні радикали, такі як SOD, GSH-Px і CAT, які синергетично поглинають супероксидні радикали, гідроксильні радикали та перекис водню відповідно [32] Окиснення вільними радикалами та антиоксидант Захисні системи організму знаходяться в стані динамічної рівноваги. Коли організм піддається впливу стимулів, що викликають окислювальний стрес, цей динамічний баланс може бути порушений. Надмірна продукція АФК пошкоджує білки, ліпіди та молекули нуклеїнових кислот, що зрештою призводить до старіння організмів і розвитку різних захворювань [3]. СОД може перетворювати супероксидні радикали в пероксид водню, який все ще є цитотоксичним і може генерувати гідроксильні радикали за допомогою реакції Фентона [34]. Гідроксильний радикал є одним із найактивніших АФК, який може реагувати з органічними речовинами в клітині з високою швидкістю реакції та руйнівною дією [35]. Крім того, CAT може розщеплювати гідроксильні радикали для участі в антиоксидантному захисті клітин [36]. У фізіологічних умовах антиоксидантні ферменти, такі як GSH-Px, можуть вироблятися в клітинах для захисту цих клітин від окисного пошкодження [25]. Це дослідження показало, що L. plantarum NJAU-01 може значно підвищувати активність SOD, GSH-Px, CAT і T-AOC у сироватці, серці та печінці мишей, вказуючи на те, що L. plantarum NJAU-01 пом'якшує окисне пошкодження, викликане D-галактозою. Цей ефект можна пояснити двома аспектами.L. plantarum NAJU-01 може сприяти активності антиоксидантних ферментів у мишей, регулюючи рівновагу АФК до нормального рівня у мишей. З іншого боку, він також може поглинати вільні радикали та діяти синергетично з SOD, GSH-Px і CAT, щоб зменшити окислювальний стрес. Також повідомлялося про регуляцію активності антиоксидантних ферментів пробіотичними бактеріями для Lactobacillus fermentum [37] і Lactobacillus fermen-tum ME-3 [38]. Це дослідження демонструє, що L. plan-tarum NJAU-01 має антиоксидантну дію на мишей і є багатообіцяючою альтернативою синтетичним або рослинним антиоксидантам. Його зазвичай використовують як біоджерело антиоксиданту для дослідження заквасок або функціональних продуктів [18]. Незважаючи на те, що останніми роками дослідження антиоксидантної активності LAB привернули велику увагу, дослідження основного механізму антиоксидантного окиснення L. Plantarum NJAU-01, зокрема, метаболічних шляхів, експресії білка та регуляції кишкової флори ще мізерні. Крім того, перехресність і комплементарність багатьох антиоксидантних механізмів у молочнокислих бактеріях потребують подальших досліджень.

Висновки

Це попереднє дослідження засвідчило вплив L. plan-term NJAU-01, виділеного з шинки Jinhua, на модель старіння мишей, індуковану D-галактозою. Встановлено, що додавання L. Plantarum NJAU-01 під час годівлі мишей може значно підвищити активність антиоксидантних ферментів і знизити вміст МДА. Це дослідження підтверджує можливість L. plan-tarum NJAU-01 як біоантиоксиданта та закладає основу для подальшого вивчення антиоксидантного механізму L.plantarum.

методи

Штам бактерій і препарат тварин

L.plantarum NJAU{{0}} (CGMCC14194) було відібрано з традиційно в’яленого м’ясного продукту Jinhua ham за допомогою морфологічних, біохімічних та молекулярно-генетичних методів ідентифікації [15]. Цей штам мав високу антиоксидантну активність і зберігався в Коледжі харчових наук та інженерії Університету Янчжоу [16]. Lactobacillus Plantarum NJAU-01 зберігався як заморожений (-80 ступінь ) запаси в бульйоні Де Мана, Рогози, Шарпа (MRS) (Bio-way Technology Co., Ltd, Шанхай, Китай) з додаванням 20 відсотків (в/в) гліцерин. Штам 1% інокулята двічі активували та вирощували в 10 мл бульйону MRS при 37 градусах протягом 18 годин. Бактеріальну суспензію об’ємом 100 мкл потім вносили в тверде середовище MRS за допомогою автоматичного розріджувача та чашки (посилання 414, 000, Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, France). Інокульоване тверде середовище MRS культивували при 37 градусах протягом 24 годин, а кількість життєздатних підраховували за допомогою автоматичного лічильника колоній HD (Scan 1200, Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Франція) і ступеня сканування. програмне забезпечення версії 8.0 (Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, France). Було виявлено, що концентрація бактеріальної суспензії становить 2×10' КУО/мл, і культуру штаму об’ємом 10 мл центрифугували при 6,000 g протягом 10 хвилин при 4 градусах, щоб видалити супернатант. Осад тричі промивали стерильним фізіологічним розчином, а потім розчиняли в 20 мл стерильного фізіологічного розчину, отримуючи 1×10 градусів FU/мл L.plantarum NJAU-01. Потім аліквоту 2 мл бактеріальної суспензії при 1 × 10 градусів FU/мл було видалено в нову пробірку для об’єднання з 18 мл стерильного фізіологічного розчину для отримання дози 1 × 10 градусів FU/мл бактерій. Аналогічно, концентрація 1×107 КУО/мл була досягнута шляхом розведення бактеріальної суспензії 1×10 градусів КУО/мл. Для експериментальної тварини були обрані миші КМ класу SPF (самки, віком 4 тижні, вагою 18-20 г). Корм і підстилку для тварин надав Інститут порівняльної медицини Університету Янчжоу (Янчжоу, Цзянсу, Китай). Усі експерименти на тваринах були схвалені Комітетом із захисту тварин та етики Університету Янчжоу та відповідали вказівкам Інституційного адміністративного комітету та Комітету з етики лабораторних тварин (номер ліцензії IACUC: 201811009). Мишей вирощували при 20±2 градусах з відносною вологістю 55±5 відсотків. Щурів випадковим чином годували стандартною щурячою їжею протягом південного циклу світла та темряви (світла фаза з 7:00 ранку до 7:00 вечора). Чотирьох мишей вирощували в клітці, годували вільним від патогенів раціоном і водою. Усі матеріали, включаючи кришки, годівниці, пляшки та підстилку, перед використанням автоклавували. Мишей акліматизували протягом одного тижня перед встановленням моделі старіння мишей.

Створення мишачої моделі старіння

Була встановлена ​​модель старіння мишей, індукована підгострою D-галактозою, і була використана Zhao et al. з невеликими змінами [39]. Спосіб введення галактози проводили шляхом підшкірної ін'єкції в область шиї та спини. Загалом 48 мишей SPF були випадковим чином розподілені на 6 груп (8 щурів на групу) після одного тижня акліматизації. Випадкові числа були згенеровані за допомогою стандартної функції=RAND() у Microsoft Excel. Мишам у кожній групі, крім контрольної, підшкірно вводили 500 мг D-галактози на кг маси тіла (Shanghai Blue Season Biological Co., Ltd, Шанхай, Китай) протягом 4 тижнів один раз на день (розчин D-галактози, 50 г/л). Контрольній групі вводили 10 мл стерильного фізіологічного розчину на кг маси тіла. Крім того, три групи лікування отримували внутрішньошлункові дози L.Cistanche tubulosa дозування redditPlantarum NJAU-01 (10' КУО/мл, 10 градусів КУО/мл і 10 градусів КУО/мл) у дозі 20 мл на кг маси тіла та позначено як група LP1, група LP2 та група LP3 відповідно. Мишей у контрольній групі та групі старіння внутрішньошлунково годували стерильним фізіологічним розчином у дозі 20 мл/кг щодня. Мишей у групі позитивного контролю отримували 1 мг/мл вітаміну С (Vc) у дозі 20 мл/кг щодня. Весь експеримент тривав чотири тижні.

Підготовка зразків тканин

Мишей евтаназували до несвідомого стану шляхом внутрішньочеревної ін'єкції 3% ізофлурану. Припинення серцевих скорочень і відсутність реакції на шкідливий подразник (ущипування задньої лапи) використовувалися як критерії верифікації смерті. У мишей видаляли очне яблуко та брали кров. Потім кров негайно центрифугували при 3,00xg протягом 10 хв при 4 градусах, щоб отримати сироватку, і зберігали при -20 градусах до аналізу. Після евтаназії мишей стратили без свідомості, витягнувши шийні хребці, а печінку, серце, селезінку, нирки, легені та мозок зібрали та зважили для визначення показників органів. Зразки печінки та серця гомогенізували в 10-відсотковому гомогенаті тканини з 0,9 відсотками NaCl, а супернатант збирали центрифугуванням, як зазначено вище.

Виявлення параметрів

T-AOC і антиоксидантну ферментативну активність SOD, GSH-Px і CAT, а також вміст MDA визначали за допомогою набору для аналізу загальної антиоксидантної здатності (метод ABTS, A015-2-1), аналізу супероксиддисмутази (SOD). набір (метод WST-1, A001-1-2), набір для аналізу глутатіонпероксидази (GSH-PX) (колориметричний метод, A0060201), набір для аналізу каталази (CAT) (колориметричний метод, A007-2-1 ) і набір для аналізу малонового діальдегіду (MDA) (метод TBA, A003-2-1) ​​відповідно. Усі набори були придбані у Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute Co, Ltd (Нанкін, Цзянсу, Китай). Усі зразки тестували в трьох повторах, а процедури виявлення проводили відповідно до інструкцій.

Статистичний аналіз

Дані були проаналізовані за допомогою програмного забезпечення Data Processing System 7.05 (Hangzhou Ruifeng Information Technology Co., Ltd, Ханчжоу, Китай). Різні середні порівнювали методом нового комплексного діапазону Дункана. Перевірку статистичної значущості проводили на рівні 0,05 (P<>

Ця стаття взята з Ge et al. BMC Microbiology (2021) 21:182 https://doi.org/10.1186/s12866-021-02248-5