Антиноцицептивна та протизапальна активність, спричинена Cistanche Deserticola у гризунів

Контакти:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Лі-Вей Лінь та ін

Анотація

У цьому дослідженні кореневища оЦистанхеdeserticola(Orobanchaceae, скорочено CD) екстрагували 50% етанолом і впорядковано виділяли етилацетатом, н-бутанолом і водою. Анальгетик іанти-запальнийЕфекти екстракту CD і трьох шарів були оцінені на кількох моделях тварин. CD(Cistanchedeserticola)екстракти ефективно пригнічували реакцію звивання, викликану 1% оцтовою кислотою, і двофазні реакції злизування, викликані 1% формаліном, а також зменшували набряк, викликаний 1% карагенаном, але не зимозаном. Крім того, бутановий і водний шари CD(Cistanchedeserticola)екстракт не тільки зменшив біль, викликаний оцтовою кислотою і формаліном, але також зменшив набряк, викликаний карагенаном. Вплив бутанового шару CD(Cistanchedeserticola)екстракту краще, ніж у водного шару. Крім того, ефект бутанового шару CD(Cistanchedeserticola)екстракт не був скасований налоксоном. Ці результати показали, що має знеболювальну діюанти-запальнийвпливів, а бутановий і водний шари є головним чином активними компонентами. Крім того, анальгетик іанти-запальнийвплив бутанового шару CD(Cistanchedeserticola)екстракту не були пов’язані з опіоїдними рецепторами та імунною системою.

Ключові слова:Cistanche deserticola; Анальгетичну активність; Протизапальна активність

1. Введення

Цистанхеdeserticolaмама (Orobanchaceae, скорочено CD), місцева трава в Китаї широко використовується в традиційній медицині для різних терапевтичних процедур, включаючи заспокійливі, болезаспокійливі та імунні засоби (Lee, 1986). Сучасні фармакологічні дослідження вказали на CD(Cistanchedeserticola)екстракт володів імунопосиленням (Chin and Su, 1993), ефектом поглинання вільних радикалів (Hsu et al., 1995) і підвищенням активності SOD (Chang et al., 1995). У недавньому дослідженні реакція вільних радикалів відіграла значну роль у запальних процесах (Arrigoni-Martelli, 1985). Таким чином, у цьому дослідженні була зроблена спроба дослідити передбачувані знеболюючі ефекти CD(Cistanchedeserticola)екстракт у мишей за допомогою тесту звивання, викликаного оцтовою кислотою (Taber et al., 1969) і тесту злизування, індукованого формаліном (Shibata et al., 1989). По-друге, ми теж вивчали можливіанти-запальнийдіяльності CD(Cistanchedeserticola)екстракт про класичний запальний процес з тестом на набряк, індукований карагенаном (Winter et al., 1962) та альтернативний запальний процес з тестом на набряк, індукований зимозаном (Tarayre et al., 1989). Нарешті, ми досліджували активні шари екстракту CD, розділені різними розчинниками. '

2. Матеріали та методи

2.1. Рослинна сировина та екстракти

Кореневища CD(Cistanchedeserticola)були придбані на ринку Тайваню та підтверджені професором MT Hsieh. Зразок ваучера (№ CMC-ICPS-000626) зберігався в гербарії Інституту китайських фармацевтичних наук Китайського медичного коледжу для подальшого використання. Вилучення та ізоляція CD(Cistanchedeserticola)слідкували за попередніми звітами (Lu, 1998). CD(Cistanchedeserticola)екстракту (вихід 34,2 відсотка) і три шари*/етилацетатний шар, бутаноловий шар і водний шар (їх вихід 3,4, 10,2, 30,6 відсотка) (скорочено CDE, CDB і CDW відповідно)*/були використані для приготування екстрактів.

2.2. Приготування екстрактів і препарату

CD(Cistanchedeserticola)екстракт ({{0}}.1, 0,3, 1 г/кг) і три шари CD(Cistanchedeserticola)екстракти ({{0}}.03, 0.1, 0.3 г/кг) розчиняли в 0,5% карбоксиметилцелюлози та вводили перорально за 60 хвилин до до ін’єкції індуктора. Ацетилсаліцилову кислоту (ASA) (100, 300 мг/кг) та індометацин (IN DOL) (10 мг/кг) готували у вигляді суспензії з 0,5% карбоксиметилцелюлози та вводили внутрішньочеревно перед ін’єкцією індуктора. Налоксон (1 мг/кг) розчиняли фізіологічним розчином.

2.3. Тварини

Для дослідження використовували самців щурів Sprague-Dawley (200-250 г).анти-запальнийдіяльності. Самців мишей ICR (20-25 г) використовували для тестування аналгетичних ефектів. Усіх тварин використовували в експериментах відповідно до Керівних принципів догляду та використання лабораторних тварин. Перед початком експерименту їх витримували принаймні 1 тиждень у середовищі з регульованою температурою 239/1 8C і 60-відсотковою вологістю з вільним доступом до стандартної їжі в гранулах (поставлено та розроблено Fwusow Industry Co. LTD., Тайвань). ) і водопровідної води, де підтримувався цикл світло/темрява 12-12 год (світла фаза: 08:00-20:00 год). Потім були введені ліки та знеболювальний засібанти-запальнийаналізи проводили подвійним сліпим методом. Після вимірювання поведінки всі тварини були вбиті вуглекислим газом.

2.4. Антиноцицептивне дослідження

2.4.1. Реакція корчання живота, викликана оцтовою кислотою, у мишей

Мишей випадковим чином розділили на кілька груп. Кожній миші вводили внутрішньочеревно 1% розчин оцтової кислоти (10 мл/кг маси тіла). Мишей поміщали в індивідуальні бокси для спостереження. Симптоми звивання живота, спричиненого оцтовою кислотою, були подібні до тих, що описані Taber et al. (1969). Контрольні тварини отримували розчини носія в тих самих експериментах. Через п'ять хвилин після ін'єкції оцтової кислоти підраховували кількість реакцій корчів на мишу протягом 10 хв під час індукованих оцтовою кислотою корчів живота. Нарешті, кількість реакцій корчання дозволила нам виразити відсоток захисту, використовуючи наступне співвідношення: (контрольне середнє значення для лікування) /100/ контрольне середнє.

2.4.2. Індукована формаліном реакція лизання у мишей

Цей метод являв собою модифікацію описаного Shibata et al. (1989). Кожну мишу поміщали в спостережну камеру на акрилову прозору пластину на 5 хвилин перед ін’єкцією формаліну. Під підлогою велике дзеркало було нахилене під кутом 458, щоб можна було чітко спостерігати за лапами тварини. Тваринам вводили 25 мл 1% формаліну в праве підошве. Потім кожну тварину повертали в камеру і спостерігали два чітких періоди інтенсивної реакції лизання. Перший період (ранню фазу) реєстрували 0 /5 хв після ін’єкції формаліну, а другий період (пізню фазу) реєстрували через 10 /35 хв після ін’єкції. Час(и), витрачений на реакцію облизування лапи, в яку введено ін'єкцію, вимірювали як індикатор реакції на біль.

2.5. Протизапальне дослідження на щурах

Theанти-запальнийактивність визначали у щурів шляхом вимірювання середнього збільшення об’єму задньої лапи після підошовної ін’єкції запальних агентів, таких як карагенан (Winter et al., 1962) або зимозан (Tarayre et al., 1989). Тваринам вводили 0.1 мл 1% карагенану або 2% зимозану в праву задню лапку під підошовний апоневроз. Запалення кількісно оцінювали в мілілітрах за допомогою плетизмометра (7150 Ugo Basile), який фіксував невеликі відмінності в рівні води, спричинені зміщенням об’єму. Перед будь-яким лікуванням визначали середній об’єм задніх лап кожної тварини (Vo) за допомогою трьох вимірювань, які не відрізнялися більше ніж на 4 відсотки (точність приладу). Потім через 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 хв після введення збудників запалення визначали середній об’єм задніх лап кожної тварини (Vt) за трьома вимірюваннями, які не відрізнялися від більш ніж 4 відсотки.

Відсоток набряку при кожному записі розраховували шляхом порівняння середнього об’єму задніх лап кожної тварини (Vt) після ін’єкції збудників запалення із середнім об’ємом задніх лап кожної тварини (Vo) перед будь-яким лікуванням (Palanichamy і Нагараджан, 1990). Відсотки інгібування були отримані для кожної групи за допомогою наступного співвідношення: [(Vt-Vo)контроль /(Vt-Vo)оброблені]-100/(Vt-Vo)контроль.

2.6. Статистичний аналіз

Всі дані, отримані під час знеболювального іанти-запальнийактивність виражали в термінах середнього значення та стандартних помилок і далі аналізували за допомогою одностороннього дисперсійного аналізу ANOVA з наступним тестом Шеффа. Коли ймовірність (P) була меншою за 0.05, різницю вважали значною.

3. Результати та їх обговорення

Попереднє лікування тварин пероральними дозами CD(Cistanchedeserticola)екстракту (0.1-1 г/кг) призвело до дозозалежного та значного пригнічення індукованої оцтовою кислотою реакції звивання (табл. 1) і двофазних фаз індукованої формаліном реакції злизування у мишей ( Рис. 1(A)). Гальмування, викликане CD(Cistanchedeserticola)екстракту в дозі 1 г/кг на реакцію корчання, спричинену оцтовою кислотою, і реакцію злизування, спричинену формаліном, становили приблизно 54 і 45 відсотків відповідно. Позитивний контроль ацетилсаліцилової кислоти в кількості 0.1-0.3 г/кг також зменшував спричинену оцтовою кислотою реакцію корчів із інгібуванням 45-64 відсотків (табл. 1). Однак інший позитивний контрольний індометацин у дозі 10 мг/кг інгібував лише пізню, але не ранню фазу індукованої формаліном реакції злизування у мишей з максимальним інгібуванням 32 відсотки (рис. 1(A)). Крім того, лише бутановий і водний шари серед трьох шарів CD(Cistanchedeserticola)екстракт при 0.1-0.3 г/кг також викликав значний антиноцицептивний ефект, і ці знеболювальні ефекти бутанолового шару були кращими, ніж водного шару (таблиця 1 і рис. 1(B)). . По-друге, ми оцінилианти-запальнийдіяльність КД(Cistanchedeserticola)екстракт і три шари проти класичного (спричиненого карагенаном) та альтернативного (спричиненого зимозаном) утворення набряку. Ми знайшли цей компакт-диск(Cistanchedeserticola)екстракт 0.1-1г/кг також суттєво пригнічував утворення спричиненого карагенаном набряку залежно від дози, а індометацин у дозі 10 мг/кг також ефективно пригнічував утворення спричиненого карагенаном набряку у щурів (рис. 2). Однак утворення набряку, викликаного зимозаном, не пригнічувалося CD(Cistanchedeserticola)екстракт 0.1-1 г/кг у щурів (дані не показані). Крім того, лише бутановий шар серед трьох шарів CD(Cistanchedeserticola)екстракт при 0.1-0.3 г/кг також значно пригнічував спричинене карагенаном утворення набряку у щурів (рис. 2). Відповідно до фітохімічних звітів, актеозид і бурштинова кислота, що належать до інгредієнтів бутанолового шару CD(Cistanchedeserticola)екстракту (Hsu et al., 1994, 1995), володіванти-запальнийактивність на утворення набряків, викликаних хімічними речовинами (Murai та ін., 1995; Kabachnyi та ін., 1987). З наших поточних даних та інших попередніх звітів ми запропонували кореневища CD(Cistanchedeserticola)володів болезаспокійливим іанти-запальнийактивності у гризунів, а активні компоненти в основному виходять у бутаноловому шарі CD(Cistanchedeserticola)екстракт. Чи є актеозид і бурштинова кислота діючими речовинами CD(Cistanchedeserticola), виділимо та оцінимо їх знеболювальну таанти-запальнийдіяльності в майбутньому.

Рис. 1. Ефект CD(Cistanchedeserticola)екстракт ({{0}}.1, 0,3 і 1 г/кг), етилацетат, бутанол і водний шари CD(Cistanchedeserticola)екстракт (CDE, CDB і CDW) ({{0}}.03, 0.1 і 0.3 г/кг) та індометацин (INDOL, 10 мг/кг) на ранній (0/5 хв) та пізній фазі (10/35 хв) індукованої формаліном реакції злизування у мишей. Кожне значення представлено як середнє 9/SE (N /7). *PB/0,05, *** PB/0,001, порівняно з групою VEH.

Рис. 2. Ефект CD(Cistanchedeserticola)екстракт ({{0}}.1, 0,3 і 1 г/кг), етилацетат, бутанол і водний шари CD(Cistanchedeserticola)екстракт (CDE, CDB і CDW) ({{0}}.03, {{10}}.1 і 0,3 г/кг) та індометацин (INDOL, 10 мг/кг) на спричинений карагенаном набряк лап у щурів. Кожне значення представлено як середнє 9/SE (N /6). *PB/0,05, ** PB/0,01, порівняно з групою VEH

Крім того, Shibata et al. (1989) припускають, що рання фаза індукованої формаліном відповіді на злизування була пов’язана з брадикініном і субстанцією Р, а пізня фаза була пов’язана з брадикініном, аутокрином і простагландином. Наші поточні дані вказують на те, що налоксон не скасуваванти-запальнийактивності бутанольного шару CD(Cistanchedeserticola)екстракту на обох фазах реакції злизування, спричиненої формаліном (рис. 3), і знеболювального ефекту на реакцію корчання, спричинену оцтовою кислотою (табл. 1). Тому знеболювальний іанти-запальнийефекти шару бутанолу екстракту CD можуть не бути пов’язані з опіоїдними рецепторами. Крім того, CD(Cistanchedeserticola)екстракт і його бутаноловий шар лише пригнічували спричинене карагенаном утворення набряку у щурів. Набряк, викликаний карагенаном через інфільтрацію поліморфноядерних лейкоцитів і активовану кінінову систему, особливо брадикінін, відрізняється від набряку, викликаного зимозаном через приплив моноцитів і активовану імунну систему (Damas et al., 1990; Dawson et al., 1991). Бурштинова кислота, інгредієнт бутанолового шару екстракту CD, пригнічує функцію поліморфноядерних лейкоцитів (Rotstein et al., 1985). Ці результати показали, що анальгетик іанти-запальнийефект бутанольного шару CD(Cistanchedeserticola)екстракт може бути пов’язаний із кініновою системою, але не з опіоїдними рецепторами та імунною системою, хоча CD(Cistanchedeserticola)володів імуностимулюючою дією (Chin and Su, 1993). Для докладного механізму аналгетики іанти-запальнийактивність, ми будемо далі досліджувати активні шари або інгредієнти екстракту CD.

Цистанхеtubulosaмає багато ефектів, натисніть тут, щоб дізнатися більше

Список літератури

Аррігоні-Мартеллі, Е., 1985. Фармакологія поглинання вільних радикалів при запаленні. Міжнародний журнал тканинних реакцій 7, 513/519.
Чанг Ю., Ву Х., Ван С.Н., Ченг Х.К., 1995 р. Дослідження сильного впливуЦистанхеdeserticolaMa., Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck і Cistanche tubulosa (Schenk) R Wight. Китайський журнал китайських матеріалів і медицини 26, 143/146.
Chin, HL, Su, YC, 1993. Дослідження фармакологічних ефектівЦистанхеdeserticolaмама Китайський журнал китайських матеріалів і медицини 19, 143/146.
Damas, J., Bourdon, V., Remacle-Volon, G., Adam, A., 1990. Кініни та перитонеальні ексудати, індуковані карагеніном і зимозаном у щурів. Британський фармакологічний журнал 101, 418/422.

Доусон Дж., Седжвік А.Д., Едвардс Дж.К., Ліз П., 1991. Порівняльне дослідження клітинної, ексудативної та гістологічної відповідей на карагенан, декстран і зимозан у мишей. Міжнародний журнал тканинних реакцій 13, 171/185.

Hsu, WH, Chu, SH, Chao, CH, Hsu, Y., Yuan, KW, Yen, CH, Chi, CY, Chan, C., 1994. Дослідження хімічних складовихЦистанхеdeserticolaмама Китайський журнал китайських матеріалів і медицини 25, 509/513.
Hsu, WH, Chu, SH, Sheng, LC, Yuan, KW, Mao, CN, 1995. Дослідження хімічних складових і фармакологічних ефектівЦистанхеdeserticolaмама і Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. Традиційні китайські лікарські засоби 26, 143/146.
Кабачний В. І., Черних В. П., Дроговоз С. М., Голубенко Ю. А., Богуцька Е. Є., 1987. Пошук.анти-запальнийпрепарати серед похідних гетериламідів бурштинової кислоти. Фармакологія і токсикологія 50, 94/97.
Лі, С.Л., 1986. Пен-Цао-Кун-Му. Публікації Національного дослідницького інституту китайської медицини, Тайбей, с. 20.
Lu, MC, 1998. Дослідження седативного ефектуЦистанхеdeserticola. Журнал етнофармакології 59, 161/165.
Murai, M., Tamayama, Y., Nishibe, S., 1995. Фенілетаноїди в траві Plantago lanceolata та інгібуюча дія на індукований арахідоновою кислотою набряк вуха миші. Planta Medica 61, 479/480.
Palanichamy, S., Nagarajan, S., 1990. Анальгетична активність екстракту листя Cassia alata та кемпа Eerol 3-0-Sophoroside. Журнал етнофармакології 29, 73/78.
Rotstein, OD, Pruett, TL, Fiegel, VD, Nelson, RD, Simmons, RL, 1985. Бурштинова кислота, метаболічний побічний продукт видів Bacteroides, пригнічує функцію поліморфноядерних лейкоцитів. Інфекція та імунітет 48, 402/408.
Shibata, M., Ohkubo, T., Takahashi, H., Inoki, R., 1989. Модифікований формаліновий тест: характерна двофазна реакція на біль. Біль 38, 347/352.
Тейбер, Р. І., Парник, Д. Д., Ренделл, Дж. К., Ірвін, С., 1969. Взаємодія агоністів і антагоністів опіоїдів на розтягнення живота у мишей, спричинене оцтовою кислотою. Журнал фармакології та експериментальної терапії 169, 29/38.
Тарайр, Дж.П., Делхон, А., Аліага, М., Барбара, М., Брюнікель, Ф., Кайол, В., Пуех, Л., Консул, Н., Tisne-Versailles, J., 1989.
Фармакологічні дослідження запалення зимозану у щурів і мишей. 1: індукований зимозаном набряк лап у щурів і мишей. Фармакологічні дослідження 21, 375/384.
Winter, CA, Risley, EA, Nuss, GW, 1962. Індукований карагенаном набряк задньої лапи щура як аналіз наанти-запальнийнаркотики. Праці Товариства експериментальної біології та медицини 111, 544/547.