4.6. Речовини, що реагують на тіобарбітурову кислоту (TBARs)

Вміст TBAR використовували як індекс ліпопероксидації. У тканину головного мозку додавали 50 мМ фосфатний буфер (pH 7,4) до концентрації 25 мг/мл (маса/об’єм) і суспензію гомогенізували ультразвуком протягом 10 секунд. До 30 мкл гомогенату додавали 250 мкл 1% фосфорної кислоти та 75 мкл 0,6% тіобарбітурової кислоти (TBA). Суміш реагентів інкубували при 100 ◦C на водяній бані протягом 45 хв, після чого її охолоджували на крижаній бані та потім центрифугували при 3000× g протягом 10 хв при 4 ◦C. З кожного зразка відбирали супернатант об’ємом 150 мкл. Флуоресценцію вимірювали за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ортенберг, Баден-Вюртемберг, Німеччина) з фільтром збудження, встановленим на 485 нм (смуга пропускання 5 нм), і емісійним фільтром, встановленим на 530 нм (смуга пропускання 5 нм). Була виготовлена ​​калібрувальна крива з використанням малонового діальдегіду (MDA) як стандарту. Результати виражали в пмоль MDA/мг білка.

Глікозид цистанхи може також підвищувати активність СОД у тканинах серця та печінки та значно знижувати вміст ліпофусцину та МДА в кожній тканині, ефективно поглинаючи різні реактивні кисневі радикали (OH-, H₂O₂ тощо) та захищаючи від пошкодження ДНК, спричиненого ОН-радикалами. Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche мають сильну здатність поглинати вільні радикали, вищу відновну здатність, ніж вітамін С, покращують активність СОД у суспензії сперми, знижують вміст МДА та мають певний захисний ефект на функцію мембрани сперми. Полісахариди цистанхе можуть підвищувати активність SOD і GSH-Px в еритроцитах і легеневих тканинах експериментально старіючих мишей, викликаних D-галактозою, а також знижувати вміст MDA і колагену в легенях і плазмі і підвищувати вміст еластину, мають хороша очищувальна дія на DPPH, подовжує час гіпоксії у старіючих мишей, покращує активність СОД у сироватці та затримує фізіологічну дегенерацію легенів у експериментально старіючих мишей. Експерименти показали, що цистанша має хорошу антиоксидантну здатність до клітинної морфологічної дегенерації. і має потенціал бути лікарським засобом для запобігання та лікування хвороб старіння шкіри. У той же час ехінакозид у Cistanche має значну здатність поглинати вільні радикали DPPH і має здатність поглинати активні форми кисню та запобігати індукованій вільними радикалами деградації колагену, а також має хороший ефект відновлення при пошкодженні аніонів вільних радикалів тиміну.

Натисніть «Де я можу купити цистанш».

【Додаткова інформація:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

4.7. Ферментативна активність основних антиоксидантних ферментів

Для визначення активності ферментів у тканині головного мозку буфер для лізису, що містить 50 мМ фосфатний буфер (pH 7,4) і антипротеази (1 мМ EDTA, 1 мМ PMSF, 1 г/мл пепстатину та 1 г/мл лейпептину), додавали до концентрація 50 мг/мл (мас./об.). Потім суспензію обробляли ультразвуком протягом 30 секунд на крижаній бані, а гомогенат центрифугували при 10,000× g протягом 15 хвилин при 4 ◦C. Супернатанти збирали для визначення ферментативної активності антиоксидантних ферментів.

Активність супероксиддисмутази (SOD) вимірювали шляхом інгібування автоокислення пірогалолу при 420 нм [69]. Одна одиниця ферменту була визначена як кількість ферменту, необхідного для пригнічення швидкості автоокислення пірогалолу на 50 відсотків. Ферментативну активність SOD виражали в міжнародних одиницях (МО)/мг білка. Активність каталази (CAT) вимірювали в супернатантах, оброблених Triton-X-100 (1 відсоток, об’єм/об’єм), після зникнення перекису водню (H2O2) при 240 нм [70], а активність ферменту вказували як субстрат ( мкмоль H2O2) трансформований/хв · мг білка. Загальну глутатіонпероксидазу (GPx) визначали після окислення NADPH при 340 нм у присутності надлишку GR, GSH і гідропероксиду кумолу [71]. Активність GPx виражали як трансформований субстрат (нмоль NADPH)/хв мг білка. Активність глутатіонредуктази (GR) аналізували після окислення NADPH при 340 нм у присутності GSSG [72] і виражали як субстрат (нмоль NADPH), трансформований/хв · мг білка. GR та обидві активності GPx були скориговані на спонтанну реакцію за відсутності біологічних зразків (за відсутності ферменту).

4.8. Тест активності BACE1

Протокол тесту BACE1 передбачає використання специфічного для секретази субстрату (пептиду), який кон’югований з двома репортерними молекулами, а саме EDANS і DABCYL, що призводить до вивільнення флуоресцентного сигналу [73,74]. Активність BACE1 вимірювали як у корі, так і в лізатах гіпокампу. Реакцію проводили при 37 ◦C протягом 1 години з використанням 10 мкМ субстрату в 50 мМ натрій-ацетатному буфері (pH 4,5). Вимірювання інтенсивності флуоресценції проводили за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ортенберг, БаденВюртемберг, Німеччина) з фільтром збудження, встановленим на 360 нм (смуга пропускання 5 нм), і фільтром випромінювання, встановленим на 530 нм (смуга пропускання 5 нм). Рівень ферментативної активності секретази пропорційний флуорометричній реакції, а дані виражаються як х-кратне збільшення флуоресценції порівняно з фоновими контролями (реакції за відсутності субстрату або тканини). Активність BACE1 нормалізувалася з концентрацією білка. Активність BACE1 мишей, оброблених кверцетином або рутином, виражали як відсоток активності контрольних мишей TgAPP.

4.9. Експресія гена RT-PCR основних антиоксидантних ферментів, APP, BACE1, ADAM10, каспази-3 і каспази-6 та запальних цитокінів

4.9.1. Екстракція та очищення загальної РНК

Ми проаналізували різні ділянки мозку, а саме кору та гіпокамп, що зберігаються при –80 ◦C. До відомої кількості мозкової тканини додавали буфер для лізису Triomol® у співвідношенні 1:10 (маса/об’єм). Зразки гомогенізували протягом 30 с за допомогою бездротового двигуна (Pellet pestle, Sigma-Aldrich) та інкубували протягом 5 хвилин при 25 ◦C, щоб забезпечити повну дисоціацію нуклеопротеїнових комплексів. Потім додавали 0,2 мл хлороформу на кожен мл використаного буфера для лізису Triomol®. Пробірки енергійно струшували протягом 15 с та інкубували при 25 ◦C протягом 3 хв. Потім їх центрифугували при 11,000× g протягом 15 хвилин при 4 ◦C. Після центрифугування було отримано три фази, з РНК у верхній фазі.

Щоб виділити РНК, верхню фазу перенесли в іншу пробірку та осадили, додавши 0,5 мл ізопропанолу. Після ретельного змішування ізопропанолу та водного розчину шляхом інверсії суміш інкубували при кімнатній температурі протягом 10 хвилин для сприяння випаданню осаду та центрифугували при 12,000× g протягом 10 хвилин при 4 ◦C. Супернатанти видаляли, а осад промивали 75-відсотковим етанолом і центрифугували при 7500 × g протягом 5 хвилин при 4 ◦C. Гранули сушили при кімнатній температурі та розчиняли в 50 мкл води, обробленої DEPC. Для видалення слідів ДНК додавали 2,5 мкл ДНКази (без РНКази) та інкубували при 37 ◦C протягом 30 хв. Нарешті, зразки інкубували при 64 ◦C протягом 5 хвилин для інактивації ДНКази.

Згодом концентрації РНК вимірювали на спектрофотометрі UV-VIS (BMG LABTECH, Ортенберг, Баден-Вюртемберг, Німеччина) при 260 нм, а чистоту оцінювали, враховуючи коефіцієнт поглинання при 260 і 280 нм (A260/A280).

Визначення цілісності та чистоти РНК проводили за допомогою електрофорезу в 1-відсотковому агарозному гелі, пофарбованому GelRed і візуалізованому в УФ-світлі, де, якщо РНК була інтактною, дві верхні смуги, що відповідають рибосомній РНК (28S і 18S), і дві нижні смуги що відповідає транспортній РНК (тРНК) і 5S рибосомній РНК.

4.9.2. Синтез комплементарної ДНК (кДНК).

кДНК є набагато стабільнішою, ніж РНК, і тому дозволяє зручніше та безпечніше поводитися зі зразками. кДНК синтезували з мРНК шляхом ретротранскрипції з використанням набору для синтезу кДНК першого ланцюга для RT-qPCR (Fermentas Life Sciences).

Для здійснення ретротранскрипції для синтезу кДНК до 2 мкг РНК додавали 11 мкл води, обробленої DEPC, і 1 мкл 10X Random праймерів. Потім суміш інкубували при 65 ◦C протягом 10 хвилин для денатурації РНК. Після цього пробірки негайно нагрівали до 4 ◦C на 5 хвилин, щоб уникнути ренатурації РНК. Суміш реагентів для синтезу кДНК показана в таблиці S1 (додаткові дані).

До кожного зразка додавали вісім мкл реакційної суміші. Весь об’єм поміщали на дно пробірок та інкубували при 42 ◦C протягом 60 хв. Нарешті, реакцію зупиняли шляхом інактивації зворотної транскриптази шляхом нагрівання її при 70 ◦C протягом 10 хв.

4.9.3. ПЛР в реальному часі

Основною особливістю ПЛР в реальному часі є те, що аналіз продуктів відбувається в процесі ампліфікації шляхом визначення флуоресценції. Таким чином, процеси ампліфікації та детекції відбуваються одночасно в одній пробірці чи флаконі без необхідності будь-яких подальших дій. Для ПЛР у реальному часі використовуються термоциклери, які можуть посилювати та виявляти флуоресценцію одночасно. Ми використовували термоциклер LightCycler реального часу (Roche Diagnostics, Мангейм, Німеччина).

У таблиці S2 (Додаткові дані) наведено перелік реагентів, необхідних для ПЛР у реальному часі з використанням специфічних для послідовності праймерів і барвника, що зв’язує ДНК (SYBR Green I, Roche Molecular Systems, Inc., Роткройц, Швейцарія) як системи виявлення.

Для розробки праймерів для різних кількісно визначених маркерів була використана програма біоінформатики Primer3Plus, для якої ми взяли послідовності кДНК генів, що цікавлять, із бази даних відкритого доступу Medline. Праймери були поставлені компанією Merck (Sigma-Aldrich). Температура гібридизації та послідовність різних використаних праймерів наведені в таблиці S3 (додаткові дані).

Умови реакції для ампліфікації цікавих генів наведено в таблиці S4 (додаткові дані).

Нарешті, зразки піддавали програмі плавлення: 95 ◦C протягом 15 с, 65 ◦C протягом 30 с і до 98 ◦C зі швидкістю 0,1 ◦C/с з безперервним записом флуоресценції.

Для кількісного визначення рівнів кДНК використовувався метод порівняння порогів циклу (Ct) [75], використовуючи GADPH як економа. Ампліфікацію економки проводили паралельно з аналізованим геном. Значення Ct розраховували за допомогою програмного забезпечення 4.0, наданого LightCycler (Roche Diagnostics, Мангейм, Німеччина). Програмне забезпечення дозволяє розрізняти флуоресценцію внаслідок ампліфікації зразка та фон. Також були записані криві плавлення. Визначення температури плавлення ампліфікованого фрагмента дозволило охарактеризувати ампліфікований продукт. Розмір смуг перевіряли на 1,5% агарозному гелі.

Варіації експресії досліджуваного гена при лікуванні кверцетином або рутином виражали як функцію контрольного TgAPP (миші без лікування) і нормалізували цю експресію рівнями GADPH. Змінна кратність (2−∆∆Ct) представляє кількість разів, коли цікавий ген було модифіковано під час конкретного лікування контрольних мишей.

4.10. Статистичний аналіз

Усі випробування проводили щонайменше в двох примірниках і в трьох різних експериментах. Отримані результати виражені як середнє ± стандартна помилка. Односторонній дисперсійний аналіз (ANOVA) було виконано після того, як дані були протестовані та продемонстровано, що вони відповідають нормальному розподілу. Були проведені множинні порівняльні тести Ньюмана-Кейлса, які досліджували середні відмінності між групами. Значення p < 0.05 вважалися значущими. Для статистичного аналізу використовувалося програмне забезпечення SigmaPlot 11.0.

5. Висновки

Дієтичні звички та харчові добавки можуть впливати на окисно-відновний статус клітин. Виходячи з цього, ми мали на меті покращити клітинний окислювально-відновний гомеостаз у мишачої моделі AD з флавоноїдною дієтою, що містить кверцетин або рутин, щоб полегшити амілоїдну патологію, враховуючи взаємодію між клітинним окисно-відновним статусом і протеасомозалежними амілоїдними особливостями при безсимптомному AD. Наші набори даних є релевантними, оскільки ефекти флавоноїдів, відображені в моделі миші TgAPP, узгоджуються з тими, про які повідомлялося раніше в наших моделях in vitro та ex vivo.

На завершення, наші результати показують, що початок дієтичного лікування на безсимптомній стадії або при появі симптомів, подібних до AD, може відновити окислювально-відновний статус клітин і фізіологічну обробку АРР за допомогою одночасної регулярізації експресії АРР і активності BACE1.

Хоча важко екстраполювати наші висновки на стан людини, вони можуть мати широкі наслідки для реакції людини на майбутні терапевтичні засоби. З двох флавоноїдів рутин із загалом більш помітними ефектами in vivo, здається, найбільш придатний для включення в повсякденну дієту як допоміжну терапію при AD, засновану на посиленні внутрішньоклітинного окисно-відновного гомеостазу мозку.

Додаткові матеріали:Наступну допоміжну інформацію можна завантажити на веб-сайті. Посилання [76] цитується в додаткових матеріалах.

Авторські внески:ПБ-Б. і SM-A. задумав ідею та план експерименту, допомагав у експериментах, інтерпретував отримані результати та написав рукопис. KLJ-A. проводив експерименти, проводив аналіз даних та інтерпретував отримані результати. JB допоміг з аналізом даних і переглядом рукопису. Усі дані були згенеровані власними силами, без паперової фабрики. Усі автори погоджуються нести відповідальність за всі аспекти роботи, забезпечуючи цілісність і точність. Усі автори прочитали та погодилися з опублікованою версією рукопису.

Фінансування:Це дослідження було профінансовано Фондом медичних досліджень «Mutua Madrileña» (Четверте видання грантів для проектів медичних досліджень), Міністерством освіти та науки Іспанії (посилання AGL2008-04892-C03-02) та Міністерство науки та інновацій Іспанії (посил. CTQ2010-16170).

Заява інституційної ревізійної ради:Протоколи щодо тварин були схвалені Інституційним комітетом з догляду та використання тварин (IACUC) Мадридського університету Комплутенсе та повністю відповідали Європейській директиві 2010/63/про захист тварин, які використовуються в наукових цілях, та іспанському законодавству про добробут тварин ( Королівський указ 53/2013, 1 лютого 2013 р.).

Заява про інформовану згоду:Не застосовується.

Заява про доступність даних:Дані, які підтверджують висновки цього дослідження, доступні у відповідного автора за розумним запитом.

Подяки:Ми дякуємо Foundation Folch за грант для підготовки до докторантури KLJA.

Конфлікт інтересів:Автори заявляють про відсутність конфлікту інтересів.

Скорочення

AD, хвороба Альцгеймера; ADAM-10, білок 10, що містить домен дезінтегрину та металопротеїнази; АРР, білок-попередник амілоїду; APPswe, шведська мутація білка-попередника амілоїду; А, амілоїд-; BACE1, фермент 1, що розщеплює APP; CAT, каталаза; GPx, глутатіонпероксидаза; GR, глутатіонредуктаза; GSH, відновлений глутатіон; GSSG, окислений глутатіон; СОД, супероксиддисмутаза.

Список літератури

1. Ебенау, JL; Пелкманс, В.; Верберк, ІМВ; Verfaillie, SCJ; ван ден Бош, Каліфорнія; van Leeuwenstijn, M.; Коллій, LE; Шельтенс, П.; Прінс, Н.Д.; Баркгоф, Ф.; та ін. Асоціація ліквору, плазми та маркерів зображення нейродегенерації з клінічним прогресуванням у людей із суб’єктивним когнітивним зниженням. Неврологія 2022, 98, e1315–e1326. [CrossRef] [PubMed]

2. Домінгес, Л.Ж.; Веронезе, Н.; Вернуччо, Л.; Катанезе, Г.; Інзерілло, Ф.; Салемі, Г.; Барбагалло, М. Харчування, фізична активність та інші фактори способу життя в профілактиці зниження когнітивних функцій і деменції. Поживні речовини 2021, 13, 4080. [CrossRef]

3. Tsarbopoulos, A. Хвороба Альцгеймера: Дослідження «лікарської скрині» природи для нових терапевтичних засобів. Biomol. Концепції 2020, 11, 201–208. [CrossRef] [PubMed]

4. Еш, KH; Zahs, KR Дослідження біології хвороби Альцгеймера у мишей. Нейрон 2010, 66, 631–645. [CrossRef] [PubMed]

5. Захс, КР; Еш, К. Х. «Забагато хороших новин» — мишачі моделі Альцгеймера намагаються розповісти нам, як запобігти, а не вилікувати хворобу Альцгеймера? Тенденції Neurosci. 2010, 33, 381–389. [CrossRef]

6. Фолі, А.М.; Аммар, З.М.; Лі, Р.Х.; Мітчелл, К. С. Систематичний огляд взаємозв'язку між рівнями амілоїду та показниками когнітивного дефіциту трансгенних мишей при хворобі Альцгеймера. Дж. Альцгеймера Дис. 2015, 44, 787–795. [CrossRef]

7. Ананд Девід, А.; Арулмолі, Р.; Parasuraman, S. Огляди біологічної важливості кверцетину: біоактивний флавоноїд. Pharm. 2016, 10, 84–89.

8. Хабтемаріам, С. Рутин як природна терапія хвороби Альцгеймера: уявлення про механізми його дії. Curr. Мед. Chem. 2016, 23, 860–873. [CrossRef]

9. Мартін-Арагон, С.; Хіменес-Аліага, К.; Бенеді, Дж.; Bermejo-Bescós, P. Нейрогорметичні реакції кверцетину та рутину в клітинній лінії, що надмірно експресує білок-попередник амілоїду (клітини APPswe). Фітомедицина 2016, 23, 1285–1294. [CrossRef]

10. Чжоу, В.; Цін, Х.; Тонг, Ю.; Сонг, В. Експресія гена BACE1 і деградація білка. Енн NY акад. Sci. 2004, 1035, 49–67. [CrossRef]

11. Гутбір, С.; Spreng, AS; Делп, Дж.; Шильдкнехт, С.; Карреман, К.; Сучу, І.; Бруннер, Т.; Гроеттруп, М.; Leist, M. Запобігання нейрональному апоптозу астроцитами через тіол-опосередковану модуляцію відповіді на стрес і прискорене відновлення після протеотоксичного стресу. Клітинна смерть диф. 2018, 25, 101–117. [CrossRef] [PubMed]

12. Аояма, К. Глутатіон у мозку. Міжн. J. Mol. Sci. 2021, 22, 5010. [CrossRef] [PubMed]

13. Шоулі, А. Поживні речовини для нейрокогнітивних функцій у здоров’ї та хворобах: заходи, методології та механізми. Proc. Nutr. Соц. 2018, 77, 73–83. [CrossRef] [PubMed]

14. Апельт, Дж.; Бігль, М.; Вундерліх, П.; Schliebsm, R. Збільшення окислювального стресу, пов'язане зі старінням, корелює з моделлю розвитку активності бета-секретази та утворенням бета-амілоїдних бляшок у трансгенних мишей Tg2576 з патологією, подібною до Альцгеймера. Міжн. J. Dev. Неврологія. 2004, 22, 475–484. [CrossRef] [PubMed]

15. Хоулетт, ДР; Richardson, JC Патологія трансгенних мишей APP: модель хвороби Альцгеймера чи просто надмірна експресія APP? Гістол. Гістопатолог. 2009, 24, 83–100. [PubMed]

16. Ченчоні К.; Спаллотта, Ф.; Мартеллі, Ф.; Валенте, С.; Мей, А.; Zeiher, AM; Gaetano, C. Окислювальний стрес та епігенетична регуляція при старінні та вікових захворюваннях. Міжн. J. Mol. Sci. 2013, 14, 17643–17663. [CrossRef]

17. Tsang, AH; Chung, KK Окислювальний і нітрозативний стрес при хворобі Паркінсона. Біохім. біофіз. Acta 2009, 1792, 643–650. [CrossRef]

18. Мандал, П. К.; Сахара, С.; Трипаті, М.; Murari, G. Рівні глутатіону в мозку - новий біомаркер для легких когнітивних порушень і хвороби Альцгеймера. Biol. Психіатрія 2015, 78, 702–710. [CrossRef]

19. Чен, ДЖ; Тіягараджа, М.; Пісня, Дж.; Чен, Ч.; Херрманн, Н.; Галлахер, Д.; Рапопорт, М.Й.; Чорний, SE; Рамірез, Дж.; Андреацца, AC; та ін. Змінений центральний глутатіон і глутатіон крові при хворобі Альцгеймера та легких когнітивних порушеннях: мета-аналіз. хвороба Альцгеймера Res. Тер. 2022, 14, 23. [CrossRef]

20. Поцерніч, CB; Butterfield, DA Підвищення глутатіону як терапевтична стратегія при хворобі Альцгеймера. Біохім. біофіз. Acta (BBA)-Mol. Основа дис. 2012, 1822, 625–630. [CrossRef]

21. Раза, А.; Се, В.; Кім, KH; Дронамраджу, В.Р.; Вільямс, Дж.; Вінс, Р.; Крім того, дипептид SS ψ-GSH пригнічує окислювальний стрес і нейрозапалення на моделі миші з хворобою Альцгеймера. Антиоксиданти 2022, 11, 1075. [CrossRef] [PubMed]

22. Ян, Х.; Се, З.; Вей, Л.; Дін, М.; Ван, П.; Bi, J. Глутатіон-міметик D609 полегшує дефіцит пам'яті та зменшує відкладення амілоїду в моделі трансгенної миші A PP/PS1. Нейрозвіт 2018, 29, 833–838. [CrossRef] [PubMed]

23. Герреро-Гомес, Д.; Мора-Лорка, JA; Sáenz-Narciso, B.; Наранхо-Галіндо, FJ; Муньос-Лобато, Ф.; Паррадо-Фернандес, К.; Goikolea, J.; Седасо-Мінгес, А.; Посилання, CD; Нері, К.; та ін. Втрата окисно-відновного гомеостазу глутатіону порушує протеостаз шляхом інгібування залежної від аутофагії деградації білка. Клітинна смерть диф. 2019, 26, 1545–1565. [CrossRef] [PubMed]

24. Лефакі, М.; Папаєвгеніу, Н.; Chondrogianni, N. Redox регуляція функції протеасоми. Redox Biol. 2017, 13, 452–458. [CrossRef] [PubMed]

25. Боне-Коста, В.; Поматто, LC; Девіс, К. Дж. Протеасома та окислювальний стрес при хворобі Альцгеймера. Антиоксид. Окисно-відновний сигнал. 2016, 25, 886–901. [CrossRef]

26. Белкацемі, А.; Ramassami, C. Часова послідовність окислювального стресу в мозку від трансгенних мишачих моделей хвороби Альцгеймера, пов'язаних з амілоїдним каскадом. Вільний радикал. Biol. Мед. 2012, 52, 593–600. [CrossRef]

27. Танігава, С.; Фуджі, М.; Hou, DX Дія Nrf2 і Keap1 в ARE-опосередкованій експресії NQO1 кверцетином. Вільний радикал. Biol. Мед. 2007, 42, 1690–1703. [CrossRef]

28. Хондрогіанні, Н.; Капета, С.; Чину, І.; Василату, К.; Папассідері, І.; Гонос, Е. С. Ефекти кверцетину проти старіння та омолодження. Exp. Геронтол. 2010, 45, 763–771. [CrossRef]

29. Бодендорф, У.; Даннер, С.; Фішер, Ф.; Стефані, М.; Sturchler-Pierrat, C.; Wiederhold, KH; Штауфенбіль, М.; Паганетті, П. Експресія людської бета-секретази в мозку миші підвищує стабільний рівень бета-амілоїду. J. Neurochem. 2002, 80, 799–806. [CrossRef]

30. Ямакава, Х.; Ягісіта, С.; Футай, Е.; Ishiura, S. Ефективність інгібіторів бета-секретази знижується аномальним розташуванням бета-розщеплення білка-попередника амілоїду «шведського мутанта». J. Biol. Chem. 2010, 285, 1634–1642. [CrossRef]

31. Келлер, Д.; Erö, C.; Маркрам, Х. Щільність клітин у мозку миші: систематичний огляд. Фронт. Нейроанат. 2018, 12, 83. [CrossRef] [PubMed]

32. Младенович Джорджевич, AN; Капетану, М.; Loncarevic-Vasiljkovic, N.; Тодорович, С.; Атанасопулу, С.; Йович, М.; Првулович, М.; Тауфік, ​​Е.; Матсас, Р.; Каназір, С.; та ін. Фармакологічне втручання в модель трансгенної миші покращує патологічний фенотип, пов'язаний з хворобою Альцгеймера: залучення активації протеасоми. Вільний радикал. Biol. Мед. 2021, 162, 88–103. [CrossRef] [PubMed]

33. Таманьо, Е.; Бардіні, П.; Гульєльмотто, М.; Денні, О.; Табатон, М. Різні стани агрегації бета-амілоїду 1-42 опосередковують різні ефекти на окислювальний стрес, нейродегенерацію та експресію BACE-1. Вільний радикал. Biol. Мед. 2006, 41, 202–212. [CrossRef] [PubMed]

34. Йоріссен, Е.; Прокс, Дж.; Бернройтер, К.; Вебер, С.; Шванбек, Р.; Serneels, L.; Снеллінкс, А.; Craessaerts, K.; Татіа, А.; Тессер, І.; та ін. Дезінтегрин/металопротеїназа ADAM10 необхідна для створення кори головного мозку. J. Neurosci. 2010, 30, 4833–4844. [CrossRef]

35. Кун, PH; Ван, Х.; Дісліч, Б.; Коломбо, А.; Zeitschel, U.; Елварт, JW; Креммер, Е.; Роснер, С.; Lichtenthaler, SF ADAM10 є фізіологічно значущою конститутивною β-секретазою білка-попередника амілоїду в первинних нейронах. EMBO J. 2010, 29, 3020–3032. [CrossRef]

36. Постіна, Р.; Шредер, А.; Девахтер, І.; Bohl, J.; Шмітт, У.; Койро, Е.; Прінзен, К.; Ендрес, К.; Hiemke, C.; Блессінг, М.; та ін. Дезінтегрин-металопротеїназа запобігає утворенню амілоїдних бляшок і дефектам гіпокампу в моделі миші з хворобою Альцгеймера. Дж. Клін. Розслідувати. 2004, 113, 1456–1464. [CrossRef]

37. Ельфіки А.М.; Махмуд А.А.; Елріді, HA; Ібрагім, К. С.; Газі, Массачусетс. Кверцетин стимулює неамілоїдогенний шлях шляхом активації експресії генів ADAM10 і ADAM17 у щурячої моделі хвороби Альцгеймера, індукованої хлоридом алюмінію. Life Sci. 2021, 285, 119964. [CrossRef]

38. Копанакі, Е.; Чанг, С.; Влахос, А.; Tschäpe, JA; Мюллер, UC; Кегель, Д.; Deller, T. sAPPalpha протидіє дендритній дегенерації та загибелі нейронів, спричинених протеасомним стресом. мол. Клітинна нейронація. 2010, 44, 386–393. [CrossRef]

39. Renziehausen, J.; Hiebel, C.; Нагель, Х.; Кунду, А.; Кінс, С.; Когель, Д.; Behl, C.; Hajieva, P. Продукт розщеплення попередника бета-амілоїду sAbetaPPalpha модулює BAG3-залежне утворення агресоми та посилює клітинну протеасомну активність. Дж. Альцгеймера Дис. 2015, 44, 879–896. [CrossRef]

40. Лівінгстон, RW; Старший, М.К.; Сінгх, А.; Вестлейк, CM; Тейт, WP; Авраам, WC; Вільямс, Дж. М. Секретований протеїн-попередник амілоїду-альфа посилює LTP шляхом синтезу та переміщення Ca2 плюс -проникних рецепторів AMPA. Фронт. мол. Неврологія. 2021, 14, 660208. [CrossRef]

41. Кроуфорд, HC; Демпсі, П. Дж.; Браун, Г.; Адам, Л.; Мосс, М. Л. ADAM10 як терапевтична мішень для раку та запалення. Curr. Pharm. Des. 2009, 15, 2288–2299. [CrossRef] [PubMed]

42. Сафтіг, П.; Lichtenthaler, SF Альфа-секретаза ADAM10: металопротеаза з кількома функціями в мозку. Прог. нейробіол. 2015, 135, 1–20. [CrossRef] [PubMed]

43. Боррека, А.; Джироні, К.; Амадоро, Г.; Ammassari-Teule, M. Протилежна дисрегуляція протеїну розумової відсталості Fragile-X і асоційованого протеїну гетероядерного рибонуклеопротеїну C з посиленою трансляцією APP при хворобі Альцгеймера. мол. нейробіол. 2016, 53, 3227–3234. [CrossRef] [PubMed]

44. Августин, С.; Римбах, Г.; Августин, К.; Шлібс, Р.; Вольфрам, С.; Cermak, R. Вплив короткострокового та довгострокового лікування екстрактом гінкго білоба на рівні білка-попередника амілоїду в моделі трансгенної миші, що стосується хвороби Альцгеймера. Арк. біохім. біофіз. 2009, 481, 177–182. [CrossRef] [PubMed]

45. Боррека, А.; Валері, Ф.; Де Лука, М.; Ернст, Л.; Руссо, А.; Нобілі, А.; Корделла, А.; Корсетті, В.; Амадоро, Г.; Меркурі, NB; та ін. Тимчасове підвищення ефективності трансляції у продромальних і ранніх симптомів мишей Tg2576 сприяє патології A. нейробіол. дис. 2020, 139, 104787. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Д'Амеліо, М.; Шен, М.; Чекконі, Ф. Каспаза-3 в центральній нервовій системі: за межами апоптозу. Тенденції Neurosci. 2012, 35, 700–709. [CrossRef]

47. Ертюрк, А.; Ван, Ю.; Шен, М. Локальне обрізання дендритів і шипів за допомогою каспазо-3-залежних і протеасомно-обмежених механізмів. J. Neurosci. 2014, 34, 1672–1688. [CrossRef]

48. Д'Амеліо, М.; Каваллуччі, В.; Міддей, С.; Marchetti, C.; Пачіоні, С.; Феррі, А.; Діамантіні, А.; Де Зіо, Д.; Каррара, П.; Баттістіні, Л.; та ін. Каспаза-3 викликає ранню синаптичну дисфункцію в мишачій моделі хвороби Альцгеймера. Нац. Неврологія. 2011, 14, 69–76. [CrossRef]

49. Жерве, Ф.Г.; Сюй, Д.; Робертсон, GS; Vaillancourt, JP; Чжу, Ю.; Хуан, Дж.; Леблан, А.; Сміт, Д.; Рігбі, М.; Ширман, MS; та ін. Участь каспаз у протеолітичному розщепленні білка-попередника бета-амілоїду Альцгеймера та утворенні амілоїдогенного бета-пептиду. Cell 1999, 97, 395–406. [CrossRef]

50. Парк, Г.; Nhan, HS; Тянь, Ш.; Кавакацу, Ю.; Чжан, К.; Наварро, М.; Koo, EH Активація каспази та опосередковане каспазою розщеплення APP пов’язане з втратою синапсів, спричиненою амілоїдним білком, при хворобі Альцгеймера. Cell Rep. 2020, 31, 107839. [CrossRef]

51. Лу, округ Колумбія; Рабізаде, С.; Чандра, С.; Шайя, РФ; Еллербі, Л.М.; Є, X.; Salvesen, GS; Ку, Є.Х.; Bredesen, DE Другий цитотоксичний протеолітичний пептид, отриманий з попередника бета-білка амілоїду. Нац. Мед. 2000, 6, 397–404. [CrossRef] [PubMed]

52. LeBlanc, AC Каспаза-6 як нова рання мішень у лікуванні хвороби Альцгеймера. Євро. J. Neurosci. 2013, 37, 2005–2018. [CrossRef]

53. Альбрехт, С.; Богданович, Н.; Гетті, Б.; Вінблад, Б.; LeBlanc, AC Caspase-6 activation in familial хвороба Альцгеймера у головному мозку, що несе білок-попередник амілоїду або мутації пресеніліну I або пресеніліну II. J. Neuropathol. Exp. Нейрол. 2009, 68, 1282–1293. [CrossRef] [PubMed]

54. Моріхара, Т.; Тетер, Б.; Ян, Ф.; Лім, Г.П.; Будіно, С.; Будіно, Ф.Д.; Frautschy, SA; Cole, GM. Ібупрофен пригнічує інтерлейкін-1бета-індукцію проамілоїдогенного альфа1-антихімотрипсину для полегшення патології бета-амілоїду (Абета) у моделях хвороби Альцгеймера. Нейропсихофармакологія 2005, 30, 1111–1120. [CrossRef] [PubMed]

55. Ніу Ю.Л.; Чжан, WJ; Ву, П.; Лю, Б.; нд, Г.Т.; Ю, Д.М.; Денг, Дж. Б. Експресія пов’язаних з апоптозом білків каспази -3 і NF-kappaB в гіпокампі мишей Tg2576. Неврологія. Бик. 2010, 26, 37–46. [CrossRef]

56. Фуллер, С.; Стіл, М.; Munch, G. Активована астроглія під час хронічного запалення при хворобі Альцгеймера – чи нехтують вони своєю нейропідтримуючою роллю? Мутат. рез. 2010, 690, 40–49. [CrossRef]

57. Лі, М.; Чо, Т.; Джантаратнотай, Н.; Wang, YT; Макгір, Е.; McGeer, PL. Вичерпання GSH у гліальних клітинах викликає нейротоксичність: значення для старіння та дегенеративних неврологічних захворювань. FASEB J. 2010, 24, 2533–2545. [CrossRef]

58. Хенслі, К. Нейрозапалення при хворобі Альцгеймера: механізми, патологічні наслідки та потенціал для терапевтичних маніпуляцій. Дж. Альцгеймера Дис. 2010, 21, 1–14. [CrossRef]

59 Лу Дж.; Ву, Д.М.; Чжен, Ю.Л.; Ху, Б.; Чжан, З.Ф.; Шан, К.; Чжен, ZH; Лю, CM; Wang, YJ. Кверцетин активує AMP-активовану протеїнкіназу, зменшуючи експресію PP2C, захищаючи мозок старої миші від нейротоксичності, спричиненої високим рівнем холестерину. Я. Патол. 2010, 222, 199–212. [CrossRef]

60. Chen, JC; Хо, FM; Чао, PDL; Chen, CP; Jeng, KC; Хсу, НВ; Лі, ST; Вен Дун, В.; Лін, В. В. Інгібування експресії гена iNOS кверцетином опосередковується інгібуванням кінази IkappaB, ядерного фактора-kappa B і STAT1 і залежить від індукції гемоксигенази-1 в мікроглії BV-2 миші. Євро. J. Pharmacol. 2005, 521, 9–20. [CrossRef]

61. Двіведі, Д.; Мега, К.; Мішра, Р.; Мандал, П. К. Глутатіон у мозку: огляд його конформацій, функцій, біохімічних характеристик, кількісного визначення та потенційної терапевтичної ролі при розладах мозку. Нейрохім. рез. 2020, 45, 1461–1480. [CrossRef] [PubMed]

62. Росснер, С.; Састре, М.; Борн, К.; Lichtenthaler, SF Регуляція транскрипції та трансляції експресії BACE1 – наслідки для хвороби Альцгеймера. Прог. нейробіол. 2006, 79, 95–111. [CrossRef] [PubMed]

63. Вестерман, М.А.; Купер-Блекетер, Д.; Маріаш, А.; Котилінек, Л.; Каварабаяші, Т.; Юнкін, Л.Г.; Карлсон, Джорджія; Юнкін, С.Г.; Ashe, KH Взаємозв'язок між Abeta та пам'яттю в мишачій моделі хвороби Альцгеймера Tg2576. J. Neurosci. 2002, 22, 1858–1867. [CrossRef] [PubMed]

64. Іризаррі, MC; Локасіо, Дж. Дж.; Hyman, BT Експресія мРНК ферменту, що розщеплює бета-сайт APP, у трансгенних мишей APP: анатомічне перекриття з експресією трансгену та статичні рівні зі старінням. Am. Я. Патол. 2001, 158, 173–177. [CrossRef] [PubMed]

65. Сяо, К.; Чепмен, П.; Нільсен, С.; Екман, К.; Харігая, Ю.; Юнкін, С.; Ян, Ф.; Коул, Г. Кореляційний дефіцит пам'яті, підвищення Abeta та амілоїдні бляшки у трансгенних мишей. Наука 1996, 274, 99–102. [CrossRef] [PubMed]

66. Hsiao, K. Трансгенні миші, що експресують білки-попередники амілоїду Альцгеймера. Exp. Геронтол. 1998, 33, 883–889. [CrossRef]

67. Сімон, AM; Скіапареллі, Л.; Салазар-Колочо, П.; Куадрадо-Техедор, М.; Ескрібано, Л.; Лопес де Матурана, Р.; Дель Ріо, Дж.; Перес-Медіавілла, А.; Frechilla, D. Надмірна експресія людського APP дикого типу у мишей викликає когнітивний дефіцит і патологічні особливості, не пов'язані з рівнями Abeta. нейробіол. дис. 2009, 33, 369–378. [CrossRef]

68. Senft, AP; Далтон, Т.П.; Shertzer, HG Визначення глутатіону та дисульфіду глутатіону за допомогою флуоресцентного зонда офталевого альдегіду. анальний біохім. 2000, 280, 80–86. [CrossRef]

69. Марклунд, С.; Марклунд, Г. Участь супероксидного аніонного радикала в автоокисленні пірогалолу та зручний аналіз для супероксиддисмутази. Євро. J. Biochem. 1974, 47, 469–474. [CrossRef]

70. Ебі, Х. Каталаза in vitro. Методи Ензимол. 1984, 105, 121–126.

71. Барха де Кірога, Г.; Перес-Кампо, Р.; Лопес Торрес, М. Антиоксидантний захист і перекисне окислення в печінці та мозку старих щурів. біохім. J. 1990, 272, 247–250. [CrossRef] [PubMed]

72. Массі, В.; Williams, CH, Jr. Про механізм реакції дріжджової глутатіонредуктази. J. Biol. Chem. 1965, 240, 4470–4480. [CrossRef]

73. Джаш, К.; Гондалія, П.; Сункарія, А.; Каліа, К. МікроРНК-29b модулює активність -секретази в клітинній лінії SH-SY5Y і мозку діабетичних мишей. Клітина мол. нейробіол. 2020, 40, 1367–1381. [CrossRef] [PubMed]

74. Хіменес-Аліага, К.; Бермехо-Бескос, П.; Бенеді, Дж.; Мартін-Арагон, С. Кверцетин і рутин виявляють антиамілоїдогенну та дезагрегаційну дію на фібрили in vitro та потужну антиоксидантну активність у клітинах APPswe. Life Sci. 2011, 89, 939–945. [CrossRef] [PubMed]

75. Рамос, Каліфорнія; Боумен, Т.А.; Boles, NC; Купець, А.А.; Чжен, Ю.; Парра, І.; Фукуа, SA; Шоу, Каліфорнія; Goodell, MA Докази різноманітності профілів транскрипції окремих гемопоетичних стовбурових клітин. PLoS Genet. 2006, 2, e159.

76. Schmued, LC; Стоуерс, CC; Скаллет, AC; Xu, L. Fluoro-Jade C призводить до надвисокої роздільної здатності та контрастного маркування дегенеруючих нейронів. Brain Res. 2005, 1035, 24–31. [CrossRef] [PubMed]

Відмова від відповідальності/Примітка видавця:Твердження, думки та дані, що містяться в усіх публікаціях, належать виключно окремим авторам (авторам) і авторам (учасникам), а не MDPI та/або редакторам (редакторам). MDPI та/або редактор(и) відмовляються від відповідальності за будь-яку шкоду людям або майну, спричинену будь-якими ідеями, методами, інструкціями чи продуктами, згаданими у вмісті.

【Додаткова інформація:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】